趋化因子受体3 RNA干扰慢病毒载体的构建及对嗜酸粒细胞作用的初步研究.pdfVIP

·316。 ．论著． 趋化因子受体3RNA干扰慢病毒载体的 构建及对嗜酸粒细胞作用的初步研究 朱新华廖兵王心悦刘轲刘月辉 【摘要】 目的 构建趋化因子受体3(ehemokine3，CCR3)基因RNA干扰(RNA receptor interference，RNAi)慢病毒表达载体，了解其对嗜酸粒细胞的作用。方法针对小鼠CCR3基因序列， 设计出RNAi的靶序列，退火形成双链DNA，与经MluI、SacI、EcoRI、HindIII、BamHI和XhoI进行 酶切后的pLVX—shRNA2一m载体连接产生短发夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)慢病毒载体。应用 shRNA慢病毒载体转染293T细胞及嗜酸粒细胞，测定病毒滴度，实时定量聚合酶链反应检测嗜酸粒 细胞中CCR3基因mRNA的表达情况。结果成功构建了shRNA．mCCR3慢病毒载体，经测序与设计 合成的靶向链完全一致。荧光显微镜下观察293T细胞感染效率大于90％，病毒滴度为4× 108 TU／ml；对嗜酸粒细胞CCR3基因沉默效率为86．7％。结论成功构建CCR3基因RNAi慢病毒 表达载体，为后续感染嗜酸粒细胞，探索其在变应性鼻炎发生和发展中的作用奠定了基础。 【关键词】RNA干扰；受体，CCR3；慢病毒属；嗜酸细胞 C。onstructionandidentificationofmouse interferencelentiviralvector eosinophilsCClt3神眦RNA ZHU Ywe—hui Head Xin—hua．LIAO Xin—yue，HUKe，HU Bing，WANG DepartmentofOtorhinolaryngology andNeck Surgery，SecondAffiliatedHospital，NanchangUniversity，Nanchang330006，China author：LIU CorrespondingYue—hui，Emai2：liuyuehuiclark@21cn．con 【Abstract】Objective constructionofalentiviral vectorofchemokine Through expression receptor furtherthefunctionofCCR3 on 3(CCR3)RNAinterferenee(RNAi)ofmouse，tostudy geneeosinophils． MethodsFocusedontheCCR3 were the genesequences，RNAitargetsequencesdesigned，thentarget of DNAwere andannealedtodoublestranded was DNA．which sequencesOligo synthesized subsequently connectedto vector andXho pLVX．shRNA2一mdigestedbyMluI，SacI，EcoRI，Hindm，BamHI I， short RNAlentiviralvectorswereconstructed．ShortRNAlentiviralvectorswereconstructed． hairpin hairpi