植物次生物质对棉铃虫药剂敏感性和微粒体P450的影响研究.pdfVIP

474 农药与环境安全国际会议论文集 植物次生物质对棉铃虫药剂敏感性 和微粒体P450的影响 郑明奇1 王 霖2 王成菊1 李学峰¨ 张文吉1 (1中国农业大学应用化学系，农业部农药化学与使用技术重点实验室，北京100094； 2湖南海利集团，长沙410007) 摘要棉铃虫Helicoverpaarmigera取食槲皮素、芸香苷和单宁酸后，对溴氰菊酯的敏感 性增加；中肠微粒体P450的含量均明显下降；脂肪体微粒体P450含量无明显变化。 关键词 棉铃虫 次生物质 细胞色素P450 在昆虫与植物长期的协同进化过程中，植物次生物质构成了植物重要的化学防御体系。 这些次生物质一方面通过引起植食性昆虫忌避、拒食等方式减少植食性昆虫的危害；另一方面 又对昆虫体内的解毒酶系(如细胞色素P450、酯酶、谷胱甘肽一孓转移酶)表现出较强的诱导作 用，从而增强昆虫对次生物质和杀虫剂的适应性。 细胞色素P450酶(简称P450)作为一类普遍存在于生物体中的氧化酶系，在植物与昆 虫的长期“斗争”中发挥着极为重要的作用。一方面，植物利用P450酶系生物合成许多植 物毒素，构成植物重要的化学防御体系；另一方面，昆虫利用P450酶系降解植物毒素，以适 应植物的不断变化。因此，研究次生物质对昆虫P450的作用，不仅对研究昆虫与植物间的 相互作用有重要的意义，对利用植物次生物质控制害虫也有一定的指导意义[1|。为此，我 们研究了槲皮素、芸香苷和单宁酸对棉铃虫P450酶系以及对溴氰菊酯敏感性的影响。 1材料与方法 1．1供试昆虫 棉铃虫Helicoverpaarmigera于1988年采自河北邯郸，在室内无药剂接触条件下饲养。 1．2实验试剂 (农业部农药检定所)；单宁酸(88％)、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸(EDTA)、连二 亚硫酸钠(国产分析纯)。 1．3棉铃虫的诱导 (1)用于毒力测定的试虫：将槲皮素、芸香苷和单宁酸按0．01％、0．05％和0．02％(m／m) 基金项目：农业部高毒农药替代示范工程项目 *通讯作者。联系电话：010E-mail：lxfl966@263．net V 生物农药与生物技术 475 比例分别拌入一定量的人工饲料中，搅拌均匀后分装在灭菌后的十孔盒中，然后接入初孵幼虫 进行饲养。挑选整齐一致的3龄幼虫(体重为11～12 mg)进行生物测定；以不含次生物质饲 料饲养的棉铃虫作对照。 (2)用于生化研究的试虫：将槲皮素、芸香苷和单宁酸按0．01％、0．05％和0．02％(m／m) 比例分别拌入一定量的人工饲料中，搅拌均匀后分装在灭菌后的十孔盒中，然后挑选整齐一 致、刚进入5龄的幼虫，诱导48h，取中肠和脂肪体提取微粒体P450；以不含次生物质饲料饲 养的棉铃虫作对照。 1．4生物测定 虫的前胸背部，以丙酮为对照，每个处理10头，重复6次。处理后的试虫放入装有人工饲料的 十孔盒中继续饲养，48h后检查死亡率。 h后 (2)增效作用测定：将溶于丙酮中的氧化胡椒基丁醚(PBO)点于试虫的前胸背部，1 再点滴另一浓度药剂，具体方法同毒力测定。 1．5棉铃虫微粒体P450酶液的制备 参照Qiu等方法[2]，在蜡盘上纵向解剖棉铃虫，取出中肠或脂肪体并去除内含物后置于 EDTA，0．1 mol／L磷酸钠缓冲液中含1mmol／L mmol／ 冰冷的匀浆缓冲液(pH值7．5的0．1 LDTT，1mmol／LPTU，1mmol／LPMSF和质量分数为10％的甘油)中漂洗；将漂洗后的中 min；上清液经两层纱 肠或脂肪体置于电动玻璃匀浆器中匀浆；匀浆液在10000×g下离心15