植物磷脂酶D的分子生物学特性研究.pdfVIP

中国靡学通提2005年专刊 http：／／zntb．chinajournal．net．cn ·23· 植物磷脂酶D的分子生物学特性 袁海英1·2陈力耕t李疆2 (1浙江大学农业与生物技术学院园艺系农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室， 浙江杭州310029；2新疆农业大学园艺学院，新疆乌鲁木齐830052) 关键词：分子生物学，植物，磷脂酶D，结构域 磷脂是生物膜结构中主要的骨架部分，脂类分子 Y，并且这三种磷脂酶D之间存在差异【，l】，而随后克 聚合形成的双层结构是细胞内区室化的基础，是将 隆的植物磷脂酶D根据序列对比发现则多以a为 细胞内物质与外界隔开的屏障。随着研究的深入，人 主。目前已从多种植物中获得了磷脂酶DcDNA的 们逐步认识到膜脂不仅是细胞膜结构部分区室化中 全序列，包括水稻、玉米豫B，14】、甘蓝吣垌、烟草彻、番 的一个疏水屏障，而且在细胞生命活动中起着重要 茄its,19．铷、草莓盟】等。 作用。在高等植物中，这些功能包括膜蛋白的定位、 磷脂酶D基因是一个多基因家族，从拟南芥中 作为脂肪酸转化中的底物及激活一些酶类；而几乎 已分离获得了五种不同的磷脂酶DcDNA。从蓖麻、 所有这些功能的实现都离不开磷脂酶的水解作用。 水稻、玉米、甘蓝、豇豆、烟草、番茄及拟南芥中获得 磷脂酶是水解磷脂的一类酶，根据其水解位点的不 的磷脂酶DcDNA其氨基酸序列的一致性可达73～ 同，可将磷脂酶分为磷脂酶Al、磷脂酶A2、磷脂酶B、90％；其中两个单子叶植物水稻、玉米磷脂酶D蛋白 磷脂酶C和磷脂酶D【t】。在这五类磷脂酶中磷脂酶D可达90％的一致性，并均由812个氨基酸组成【塌。作 (Pm；EC3．1．4．4)在植物组织中普遍存在，它催化水 者实验室克隆获得的革莓磷脂酶Do与拟南芥磷脂 解磷脂末端的磷酸二酯键形成磷脂酸和亲水性的胆 酶Da的一致性也达74％；除此之外，草莓磷脂酶 碱等。早期的研究认为磷脂酶D主要是降解膜磷脂 Da与其他植物磷脂酶Da也表现出较高的一致 的代谢酶类瞄3】：近期的研究发现磷脂酶D在植物的 性，分别达到与甘蓝的80％到蓖麻的84％[m。 跨膜信号传导中也具有重要作用c4’5’曰。分子生物学研 经比较，拟南芥磷脂酶Da蛋白与磷脂酶013、 究的开展为植物磷脂酶D的研究开创了新的时代， 磷脂酶DV蛋白分别仅有40％和60％的一致性；而 本文结合作者在草莓果实磷脂酶D方面开展的研究 磷脂酶013和磷脂酶DV在氨基酸序列比较中则有 工作回顾了近年来磷脂酶DcDNA克隆，基因结构66％的一致性和81％的相似性。通过序列及生化特 及表达以及磷脂酶D蛋白结构等方面的研究进展。 性分析证实从蓖麻、甘蓝、烟草、玉米、豇豆及草莓中 1植物磷脂酶D的克隆和序列分析 获得的磷脂酶D都属于磷脂酶Da家族；水稻、番茄 早在1974年Heller就以花生种子作为酶源，报中也证实了磷脂酶D13亚族的存在；而拟南芥磷脂 道了第一例纯化的磷脂酶Dn。在过去的十几年中， 酶DY、6和‘则属于其他不同的亚族阎。 许多研究群体都致力于植物磷脂酶D的纯化研究， 对十五种植物磷脂酶D氨基酸全长序列的系统 并最终于1994年从蓖麻中获得了第一个磷脂酶D树分析显示如图1。不同植物源磷脂酶Da聚集于 克隆嘲。之后在拟南芥上获得的三个表达序列标签 进化树的前缘表明它们相对较早的起源：丽已知的 cDNA克隆与蓖麻磷脂酶D表现出相当高的序列相磷脂酶013、Y和6则表现出比磷脂酶Da更显著 的多样性和进化性(与进化树源头相对较长的距 似性；通过结合使用5’末端快速扩增法(5’-RACE)、 巢式PCR及cDNA文库筛选获得了这三个拟南芥磷离)。在所有磷脂酶Da中，拟