腺病毒介导的RNA干扰对大肠癌HCT116细胞株β-连环蛋白表达的抑制作用.pdfVIP

·321· ·实验研究· 16 腺病毒介导的RNA干扰对大肠癌HCTl 细胞株p一连环蛋白表达的抑制作用 周辉王伟军胡志前石睿蔡清萍 【摘要】 目的构建针对人B．连环蛋白(catenin)的腺病毒载体pAdHl—shl3-catenin—GFP，应用 RNA干扰(RNAi)的方法，观察其在体内和体外对人大肠癌细胞株HCTll6生长的抑制作用。方法 设计合成针对B．catenin的shRNA，并克隆至腺病毒表达载体AdHI—GFP上，制备针对p—catenin 的腺病毒载体AdHl．GFP．shl3．catenin．GFP，与腺病毒骨架载体共转染293A细胞包装病毒，采用空 斑法测定病毒滴度为5×109 bolt和报告基因检测 pfu／ral，感染HCTll6细胞。应用Western HCTll6细胞B—catemn表达水平和转录活性，噻唑蓝(MTT)比色法测定活细胞数并绘制细胞生长 曲线，建立软琼脂克隆形成实验观察肿瘤体外成瘤能力，同时建立裸鼠HCTll6细胞移植瘤模型， 观察肿瘤生长情况。结果成功构建针对B·catemn基因的RNAi腺病毒表达载体，与AdHI—GFP h和48hHCTl 16细胞B—catenin表达水平和转录活性 组比较AdHl．shl3一catenin-GFP组在感染24 显著降低，细胞的增殖和克隆形成能力则下降50％(P0．01)。体内实验表明重组腺病毒载体介导 的B—cateninshRNA明显抑制肿瘤生长(P0．01)。结论腺病毒介导的RNAi技术可有效降低B— catenin在大肠癌细胞中的表达水平，抑制肿瘤细胞在体内外的增殖活性。 【关键词】大肠癌；RNA干扰；13连环蛋白；腺病毒 effectsofadenovi阳smediated shRNAon ofcoloncancercellline Inhibitory B-catenin proHferation HCTl16 zHoU General Hui，WA^GWei-jun，HUzk—qian，eta1．Departmentof Surgery，Afiltered Med如d 200003。China ChangzhengHospitaf．theSecond删itaryUniversity．Shanghai the effectsofRNA viaadenovirus-medi· 【Abstract】0bjectiveTo inhibitory investigate silencing shRNAon ofcoloncancercellsinvitroandinvivo．MethodsShort atedB．catenin prolfferation hairpin was clonedintoadenoviral B-cmemn expression RNA(shRNA)targetinggene designed，synthesized，and vectorAdHl．GFPtoconstructa adenovirusvector fluorescent