微流控芯片上的细胞研究.pdfVIP

2006年11月 第七届全国毛细管电泳及相关微纳分离分析学术报告会文集 上海 微流控芯片上的细胞研究 施维维，叶囡楠，刘欣，於林芬，黄淮青，秦建华，林炳承+ 16023) (Ell国科学院大连化学物理研究所，大连，I l引言 微流控芯片是目前细胞研究的重要技术平台。本课题组已成功研制了包括水凝胶细胞培养、细 胞裂解与内涵物分析和细胞凋亡药物筛选等一系列用于细胞研究的微流控芯片，并力图将其运用于 生物医学、环境检测和药物开发等领域的实际应用中。 2实验部分 2．1芯片细胞培养 采用PDMS基材构建集成化细胞培养单元，利用灌流培养技术，在芯片中实现了多种细胞的培 养以及生理过程考察。此外，研制出以水凝胶为基材的具有不同微结构的微流控芯片，并将其用于 细胞培养【1](如图l、2)。 图1细胞在各种水凝胶二维微结构表面定域 图2水凝胶立体微结构 a．各种水凝胶立体微结构；b．细胞在水 凝胶微孔阵列中生长：C．微孔阵列的局 2．2芯片细胞裂解 曾在普通十字型芯片上完成了细胞在静压力作用下的输运和化学裂解‘21。近期，将进样器改为双 图3单细胞捕获、裂解和RNA分析微流 控芯片 a．用于单细胞检测微流控结构示意图 b．拦截单个细胞 c．单个K562细胞的RNA电泳谱图 池中分别加入不等量缓冲液，保持样品废液池悬空，在静压力作用下细胞由样品池流向废液池。显 微镜下观察，当单个细胞因空间位阻卡在窄通道处时(图3．b)，调平液面差，在缓冲液池中加入 SDS的同时，对分离通道两端施加高压，由此完成了单个细胞的裂解及细胞内RNA的分离检测(图 llO 2006年11月 第七届全国毛细管电泳及相关微纳分离分析学术报告会文集 上海 3-c)。这种芯片设计方式可使SDS充分接触细胞膜表面，保证细胞的快速、有效裂解，且裂解位置 相同，有利于后续内涵物分析结果在迁移时间上的重复性【3J。 2．3细胞功能研究 以药物诱导肿瘤细胞凋亡为模型，建立了一套集成化微流控芯片系统，对细胞凋亡关键事件进 行研究[4】。如图4所示，该芯片充分利用微尺度下芯片通道内的层流混合、分流特征，并结合已有的 关于芯片浓度梯度生成器的研究工作[5】，将多种药物浓度生成、芯片细胞培养、细胞受激、细胞标记 过程的监测。实验发现，在一定药物浓度范围，阿霉素诱导HepG2细胞发生凋亡，并呈现典型的细 胞凋亡特征：图5为光学显微镜和荧光显微镜形 态学观察结果；此外，采用特定的荧光探针 (AnnexinV／PI)标记细胞，呈现特征性细胞膜 改变，出现PS外翻，且随药物浓度增加，出现 PS外翻的细胞比例明显增加(图6)；同时， 线粒体膜电位也发生明显变化，采用线粒体膜电 位敏感性探针(Rh一123)标记细胞，结果表明， 一定药物浓度有诱导HepG2细胞线粒体膜电位 下降，且与药物浓度呈剂量效应(图7)。该微 流控芯片集多种单元操作于一体，可以大大简化 操作过程，缩短分析时间，降低细胞和试剂耗量， 克服传统多平皿分析的繁冗操作，一次运行可获 W4集成化细胞凋亡研究微流控芯片 得多个实验相关参数，具有潜在的生物学应用前 a1．两种浓度罗丹明一123溶液对浓度梯度生成单