樱桃李离体扩繁及再生体系建立-中国农业大学园艺学院.docVIP

中国农业大学 本科生“URP”立项申请书 项目名称 樱桃李离体繁 申 请 人 胡建芳 工作单位 园艺学院 联系电话 010 电子信箱 hujf@cau.edu.cn 填表日期 2017.4.12 中国农业大学教务处制 项目名称 樱桃李离体繁 项目起止时间 2017年5月-2018年月 项目申请人情况 姓名 胡建芳 性别 女 出生日期 1963.09 最后学历与学位 博士 专业技术职务 教授 从事专业 果树学 项目概况 樱桃李（Prunus sogdiana），蔷薇科李属，因果实外形似樱桃而颜色像李而得名。就果实营养价值而言，根据前人对新疆野生樱桃李的营养测定野生樱桃李中含有较丰富的还原性糖和总糖含量测定值为所含的人体必需氨基酸含量比联合国推荐保健食品之冠的蓝莓还要高出30%其中钙含量列群果之首樱桃李又被誉为西部钙果土保持生态系统的稳定等具有重要意义 二、实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法) 1. 文献查找与阅读 项目参加者首先阅读本课题组近年来发表的相关文章，同时学会引用关键词以及相关技术搜索到相关文献并进行阅读，深入分析文章的思路并根据项目撰写试验方案。 该环节让学生初步接触专业文献，结合查找以及阅读文献的能力，调动学生对专业研究方向的兴趣。 考核办法：学生根据项目研究目的自拟一份实验方案及技术路线交给指导教师，由老师考核评分。 试验环节 前人研究成果表明，樱桃李茎段腋芽培养在生长素类似物0.3mg/L-0.5mg/L、细胞分裂素类似物0.6mg/L-1.0mg/L的培养基上生长较好。 采用L9（正交试验设计进行樱桃李茎段腋芽培养基的优选，其个因素及三个水平分别为基本培养基（MS、、）,IAA（0.mg/L、0.mg/L、0.mg/L），6-BA（0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L）。各培养基中均加入琼脂g/L，蔗糖30g/L，调pH为5.8，在光照强度2000Lx每天光照小时，温度25℃条件下培养。每组接种40个外植体，测定增殖系数取25-30d叶龄的组培苗的中上部叶片，除去叶尖、叶缘，切成约1cm2大小接种于培养基上。采用L9（正交试验设计进行叶片离体培养基的优选三个因素及三个水平为6-BA或mg/L、1.mg/L、1.5mg/L、mg/L）；IBA（0.03mg/L、0.mg/L、0.mg/L、0.09mg/L）；暗培养时间d、21d、28d）。测定不定芽再生率及每外植体再生芽数。 3）野生樱桃李分生体器官发生途径不定芽的诱导 将已建立的樱桃李组培苗剪去叶片切为单芽茎段，平放接种于起始培养基（IM1）。待腋芽萌发后将萌发的芽尖切去，接种于诱导培养基（IM2）。待隐芽萌发再切去所萌发的芽尖以刺激其基部膨大及周围隐芽萌发，并继续接种于诱导培养基。重复切芽、继代和生长的过程，大约继代7次后形会成分生体（meristematic bulks）。统计分生体诱导率（分生体诱导率=形成的分生体个数/处理的单芽茎段）。 4）樱桃李不定芽的生根培养 选择1/2MS培养基和浓度为0.4mg/L的IBA进行试验，观察并测定每株生根条数和平均根长。 5）组培苗的移栽 将生长健壮的组培苗经过一周左右的炼苗后，移入上部基质为消毒沙，下部基质为营养土（蛭石：草炭=3:1）的营养钵中。 另：外植体消毒处理方案及培养基配方 1）外植体的消毒处理 本实验采用中国农业大学上庄实验基地的樱桃李为实验材料，于4-6月份选取当年萌发的李枝条将基部叶片摘除保留顶部 大量元素（母液Ⅰ） L 微量元素（母液）L 有机成分（母液）L 铁盐（母液）L MS培养基 NH4NO3 1650 KNO3 1900 KH2PO4 170 MgSO4·7H2O 370 CaCl2·2H2O 440 KI 0.83 H3BO3 6.2 MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 Na2MoO4·2H2O 0.25 CuSO4·5H2O 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 肌醇 ⅣB烟酸 盐酸吡哆醇（维生素B6） 盐酸硫胺素（维生素B1） 甘氨酸 FeSO4·7H2O 27.8 Na2-EDTA·2H2O 37.3 WPM培养基 NH4N03 40 Ca(NO3)2·4H2O 556 K2SO4 990 CaCl2·2H2O 96 KH2PO4 170 MgSO4·7 H2O 370 MnSO4·H2O 22.4 ZnSO4·7 H2O 8.6 CuSO4·5 H2O