生物化学和分子生物学实验 第一节 分光光度法 第二节 蛋白质定量分析 实验一 蛋白质定量分析技术.pptVIP

生物化学和分子生物学实验 1 必须穿白大褂； 2 书包放在实验台的上层架子上； 3 实验报告在实验课后24小时内由组长统一上交； 值日生注意事项强调： 1 清洁实验台上层架子； 2 用湿抹布擦黑板； 3 清洁比色皿； 4 将所有移液枪调到最大量程。 第一节 分光光度法(Spectrophotometry) 定义： 根据物质对光的吸收特性和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法。 溶液的颜色 互补色 光 可见光 光的吸收定律 A=KLC C：物质的浓度， g/L mol／L L：光程，cm， K：吸光系数 摩尔消光系数ε：当溶液浓度为lmol／L，光程为1cm时所测得的一定波长下的吸光度。 百分比吸光系数K：当溶液浓度为l00g／L，光程为1cm时所测得的一定波长下的吸光度。 吸光系数只与物质的性质和入射光的波长有关。 波长的选择 波长的选择一般是选择待测物质最大吸收峰的波长(λmax) 1．应使被测溶液有适当的光密度，适当的光密度为0.1—0.7，而以0.2—0.6最理想。 2．应使干扰影响降低至最低限度。 3．应使标准曲线在尽可能大的范围内接近直线。 待测溶液浓度的计算 1.利用标准管法计算待测溶液的浓度 2.利用标准曲线进行换算 3.利用Lambert—Beer定律 计算 A=KLC C=A/KL 利用标准