蛋白药物生产中支原体检测方法的建立及应用 (1).pdfVIP

生物技术进展 2013年 第3卷 第4期 293 296 CurrentBiotechnology ISSN 2095-2341 蛋 白药物生产 中支原体检测方法的建立及应用 刘素霞 ， 刘晓志 ，杨立霞， 赵 伟， 常 亮， 周兴军 ， 高 健 华北制药集团新药研究开发有限责任公司，抗体药物研制国家重点实验室 ，石家庄050015 摘 要：为检测中国仓 鼠卵巢细胞(CH0)细胞培养过程中的支原体污染，以CH0细胞的管家基因甘油醛-3-．磷酸脱氢 酶作为内参基 因，将内参引物和支原体引物同时放置在一个PCR体系中，确立了一种快速、准确、稳定的PCR检测方法。 通过优化两种引物的浓度配比，确定内参基因引物浓度为5 moL／L，支原体引物浓度为 10 moL／L。与DNA荧光染色法 相比，PCR法检测结果一致，减少 了假阴性结果，缩短 了检测时间，可以满足生产过程中的支原体污染的监测。 关键词：中国仓鼠卵巢细胞 ；支原体；PCR反应 DoI：10．3969／j．issn．2095-2341．2013．04．12 Developmentofa Detctection M ethod forM ycoplasma in M anufactureof RecombinantTherapeuticProteins LIU Su—xia ，LIU Xiao．z