辣根过氧化物酶酶学特性及应用进展.pdf

第3O卷第4期 山西大同大学学报(自然科学版) V()1．30．NO．4 2014年8月 JournalofShanxiDatonguniversiy(NaturalScience) Aug 2014 文章编号：1674—0874f2O141O4一()030一O5 辣根过氧化物酶酶学特性及应用进展 张丽华，蒋俊峰 (山西大同大学化学与环境工程学院，山西大同037009) 摘 要：辣根过氧化物酶 (HRP)是一种以亚铁血红素为氧化还原中心的过氧化物酶，从植物辣根的根部提取， 目前被广泛地应用在污水处理、食品工业、有机合成和分析检测等领域。本文综述了辣根过氧化物酶的结构、固 定化及辣根过氧化物酶在各个领域的应用，并对其工业应用前景及未来研究方向进行了探讨。 关键词：辣根过氧化物酶 ；固定化；辣根 中图分类号：Q554+．6，X703 文献标识码：A 辣根(十字花科)是一种耐寒的常年生草本植 催化循环的高分辨率中间体。HRP—C含有2种不 物，主要分布在世界温带地区，它的根具有很好的 同类型的金属 中心，铁(III)原卟啉IX(通常被称为 烹饪价值。辣根的根部也是过氧化物酶的丰富来 “血红素”)和2个钙原子(图1，2)。 源，至少含有 30多种HRP同功酶形式 ，其 中HRP 同功酶C(HRP—C)含量最丰富，因此统称为辣根过 氧化物酶 (horseradishperoxidase，HRP)。辣根过氧 化物酶也是一种利用过氧化氢可以氧化大多数有 机物和无机物的血红素酶。由于其比活性高、耐热 性高、酸碱稳定性好，对污染物浓度和盐度都有较 高的耐受性 ，与抗原或抗体偶联后 ，活性损失很 少，因此被广泛用于污水处理、食品工业、有机合 成和分析检测等领域。本文介绍了HRP的结构、固 定化及其在各个领域中的应用 ，并对其应用前景进 图1 HRPC的结构 行展望。 对于酶的结构和功能完整性这两者都是非常 1辣根过氧化物酶的结构 必要的。血红素基通过组氨酸侧链Na原子和血红 1976年，Welinder等 人首次确定了HRP—C是 素铁原子之间的配位键连接到酶Hisl70(近端组氨 一 组单亚基糖蛋 白，包含308个氨基酸残基和8个 酸残基)上。第二轴向配体位置 (在所谓的血红素 糖链，每分子HRP—C中有2分子C 、1分子血红素 平面前端)没被酶的静息状态 占据而是被酶转化期 辅基和4对二硫键，相对分子质量约为44000。根 间的过氧化氢 占据(图3)。小分子如一氧化碳、氰 据其等电点至少可将HRP分为5类口】：酸性(HRP- 化物、氟化物、叠氮化物结合到远端六配体过氧化 A)含糖量较高，p，值约为4；中性或微碱性(HRP— 物酶复合物的血红素铁原子上 。只有在质子化的 B，一c)含糖量低，p，值在5．75～9．63范围内；强碱 形式下，一些键才是稳定的，这是通过氢键与远端 性(HRP—D，一E)含糖量较低 ，p，值在 10．6 >12范围 血红素Arg38(远端精氨酸)和His42(远端组氨酸) 内。1990年Smith等 最早成功研制出重组酶，而且 的氨基酸侧链之间的相互作用。2个钙原子的结合 对HRP—C的结构和功能研究有 了重大的进展。 位点分别位于血红素平面的远端和近端，并且通过 1997年 ，Gajhede等 人通过x射线晶体学解出了 氢键被连接到血红素结合区 。每个钙原子结合位 HRP的三维结构，2002年贝里隆德等嘲人描述出酶 点都是七配位的，去和氧供体配体配位，氧供体配 收稿 日期：2014-02-15 作者简介：张丽华(1981一)，女，山西大同人，在读硕士，实验师，研究方向：生物无机酶化学 ，酶的固定化及其应用。 2014年