银杏黄酮异鼠李素的体外葡醛酸结合反应研究.pdfVIP

银杏黄酮异鼠李素的体外葡醛酸结合反应1 顾少君 姚彤炜* 胡静 浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室 浙江 杭州 310031 银杏叶提取物具有多种生理活性使其受到广泛关注 已有不少文献报道了银杏黄酮的提取分离 定性定量分析和药理作用等 了解银杏黄酮在体内的生物转化 排泄及代谢产物的生理活性等 对指 导临床用药有重要意义 在银杏黄酮的研究中 山奈酚和槲皮素在鼠肝微粒体中的代谢已有报道 而 异鼠李素研究很少 另有文献报道 在服用一定剂量的槲皮素苷后 血浆中测到异鼠李素峰 表明槲 皮素可以经甲基化代谢成异鼠李素 因此研究异鼠李素代谢显得有些必要 本实验旨在研究银杏黄酮 的主要成分异鼠李素的代谢情况 了解其代谢相关的主要酶系 获得代谢酶动力学参数 为进一步研 究银杏黄酮的体内外代谢打下实验基础 1 材料与方法 1.1 仪器与试药 FSH- II 型高速电动匀浆器(江苏金坛金城国胜实验仪器厂), Jouan MR1822 自动高速冷冻离心机 ( 日本日立公司) DKZ- 1 型电热恒温震荡水槽(上海医用恒温设备厂) Agilent 1100型高效液相色谱 仪 G1315B二极管阵列检测器 HP ChemStations处理软件(安捷伦科技有限公司) 异鼠李素 isorhamnetin 中国药品生物制品检定所 地非三唑注射液 diphenytriazol, DIPH 浙 江仙居制药厂 三 羟甲基 氨基甲烷(中国医药上海化学生物试剂站) 尿嘧啶二磷酸葡萄糖醛酸 UDPGA Triton X- 100 苯巴比妥 phenobarbital PB 地塞米松 dexamethasone DEX - 萘黄酮( -naphthoflavone BNF)为Sigma 公司产品 UDPGA 溶液的配制 称取UDPGA 适量 加pH7.5 磷酸盐缓冲液制成浓度为50g L- 1 的溶液 临用新配 1.2 色谱条件 分析柱 Platinum EPS-C18 4.6 mm 250 mm 5 m 流动相 pH2.0 磷酸水溶液- 四氢呋喃- 甲醇-异丙醇 65 15 10 20 流速0.5mL min- 1 检测波长 380nm 进样量 20L 1.3 微粒体制备 取Sprague-Dawley 雄性大鼠 体重150 180g,中科院上海试验动物中心 二级 证书号003 分为DEX BNF PB DIPH 和空白对照组 每组2 3 只 共3 批 PB溶于生理盐水 80 mg kg- 1 d- 1 ip 3d DIPH油注射液 30 mgkg- 1 d- 1 ip 4d DEX混悬于水 100 mgkg- 1 d- 1 ig 3d BNF - 1 - 1 [1] 溶于茶油 80 mgkg d ,ip3d空白对照组不给任何药物 按文献 方法诱导 制备微粒体和 测定微粒体蛋白质浓度 1 浙江省自然科学基金 302682 及浙江省经贸委中药现代化专项基金资助项目 *联系作者 1 1.4 体外孵育反应 取微粒体适量 加2.25g L- 1Triton X- 100 溶液 50 L 1mol L- 1 Tris-HCl 溶液 50 L 1mol L- 1MgCl 2 溶液10L 加不同浓度的底物20 L 用pH7.5 磷酸盐缓冲液稀释至1.0mL 混匀 使微粒体蛋白质 浓度为1g L- 1 底物终浓度为 0.5 50mg L- 1 在25 下预孵育3min 加尿嘧啶二磷酸葡