银杏叶黄酮的酶法强化提取工艺条件研讨.pdfVIP

L054 银杏叶黄酮的酶法强化提取工艺条件研究 许明淑 罗明芳 邢新会∗ （清华大学化学工程系生物化工研究所，北京100084） 摘 要 银杏叶总黄酮在植物细胞中以苷元和苷的形式存在，在普通的醇/水体系中苷元不易被 提取。本文利用转苷酶和糖等底物将极性低的黄酮苷元转为黄酮苷以提高总黄酮在醇水中的溶解 率；同时加入纤维素酶和果胶酶来促进银杏叶总黄酮成分的提取率。利用 Suhong475 转苷酶提取 强化银杏叶总黄酮结果表明，最佳作用温度为 55～60℃、最佳pH4.5～5.0，最适反应时间 10 个 小时。 关键词 银杏黄酮 酶法提取 转苷酶 引 言 银杏（Ginkgo biloba）素有“活化石”之称，集材用、果用、叶用观赏用于一体，叶、果、 树皮均可入药，尤其是叶用居多。由于银杏叶的主要成分黄酮和萜内酯具有心血管疾病的治 【 】 疗作用 1 ，银杏叶的开发利用具有重要研究价值。我国的银杏占世界银杏资源的 70 ％以上， 【 】 因此研究从银杏叶高效提取其有效成分十分必要 2 。 银杏叶提取纯化生产中目前常用的方法是溶剂提取和树脂分离纯化相结合的方法。黄酮化合物在银杏 【 】 叶中以两种形态存在 3 ，一是脂溶性成分如黄酮苷元类物质，二是水溶性成分如黄酮苷成分。为了充分提 【 】 取不同极性的黄酮化合物，在实际生产中要采用高浓度乙醇或其他极性低的有机溶剂提取 4 ，而由于对医 药产品和保健品的安全要求，醇水成为常用的溶剂。但目前生产中传统的醇水提取过程效率偏低、提取时 间长，乙醇浓度较高等很多缺点。为了解决这些问题，需要确立高效清洁的植物提取技术。近年，酶法提 取药用植物已成为发展中药研究的重要方法，需要从基础和应用上深入研究酶反应在植物成分转化和提取 过程的作用。人参的酶法提取研究显示，酶法能够改变人参二醇皂甙糖基，生产稀有、有高生理活性的人 【 】 【 】 参皂甙产物 5 。在山楂黄酮的提取中,用纤维素酶和果胶酶提取比传统工艺提取率提高了 16.9% 6 。 由于所述银杏叶总黄酮在植物细胞中以苷元和苷的形式存在，在醇水体系中苷元不易被提取。本研究 的目的是利用转苷酶和糖等底物将极性低的黄酮苷元转为黄酮苷从而提高总黄酮在醇水中的提取率。银杏 叶的总黄酮几乎都被以纤维素为主体的细胞壁所包围，因此改变细胞壁的纤维骨架结构和提高细胞壁通透 【7】 性是提高黄酮提取率的重要途径。本研究采用纤维素酶和果胶酶研究银杏叶总黄酮的提取过程 。 本论文利用 suhong475 转苷酶的转苷反应探讨了在醇水体系中对银杏叶总黄酮提取过 程的影响及相关影响因素；进一步研究了纤维素酶、及果胶酶复合使用对银杏叶总黄酮提取 的影响。 1 材料和方法 1.1 材料 银杏叶产自河南郑州； Suhong GA 475葡萄糖苷酶诺维信生物技术有限公司提供酶液； 纤维素酶（1500u/ul）由塞尔迪生物公司购买，果胶酶（1000u/ul）塞尔迪公司购买； 芦丁购自 sigma 公司，纯度 99%。 1．2 方法 银杏叶总黄酮提取率分析：将干燥银杏叶粉碎过筛，称取一定量上述银杏叶，加入一定体积的溶剂， 在一定温度、pH 条件下进行黄酮萃取，萃取一定时间后将提取液过滤除渣，按 1.2.1 黄酮测定方法对提取 液进行显色反应，在 510nm 测吸光度，由标准曲线计算出溶液中黄酮浓度。 总黄酮提取率计算： 溶液提取的总黄酮量（g） 提取率= 银杏