利用盘基网柄菌表达可溶性人Fas+配体研究.pdfVIP

I025 利用盘基网柄菌表达可溶性人Fas 配体* 1 1,2,** 1,2 1 3 吴小霞 卢英华 李清彪 邓旭 徐志南 1 2 （ 厦门大学化学工程与生物工程系，福建 厦门 36 1005 ； 厦门大学福建省化学生物学重点实验室, 福建 3 厦门 36 1005 ； 浙江大学化学工程与生物工程系生物工程研究所，浙江 杭州 310027 ） 摘 要 报道了可溶性人Fas 配体(shFasL)在盘基网柄菌中的克隆和表达。用PCR 扩增从激活的 人中性粒细胞中得到的编码可溶性Fas 配体胞外区中第 141 个到第281 个氨基酸的cDNA, 将其 与hCG-β信号肽基因片段融合到质粒MB 12neo 中，随后导入到盘基网柄菌AX3 细胞中，得到分 泌性表达hFasL 的两个重组工程菌AX3-pCESFL95-G2 和 AX3-pCESFL95-H3 。为提高shFasL 的 表达量, 对质粒pMB 12neo 作了改造, 得到衍生质粒pMB74, 利用质粒pMB74 克隆表达hFasL ， 获得高通量表达hFasL 的重组盘基网柄菌AX3-pLu8 。在复合培养基HL-5C 中盘基网柄菌细胞密 7 -1 度可达 1.5-2×10 mL , 重组盘基网柄工程菌 AX3-pCESFL95-G2 、AX3-pCESFL95 -H3 及 AX3-pLu8 分泌的shFasL 浓度分别为70 µg L-1 、23.5 µg L-1 及206 µg L-1 。利用合成培养基SIH 培 7 -1 养盘基网柄菌细胞密度达到了4-5×10 mL , 重组盘基菌AX3-pCESFL95-G2 、AX3-pCESFL95 -H3 及AX3-pLu8 表达的shFasL 浓度分别达到了111 µg L-1 、106 µg L-1 和420 µg L-1 。 关键词 可溶性人Fas 配体 盘基网柄菌 培养 EXPRESSION OF THE SOLUBLE HUMAN FAS LIGAND * IN DICTY OSTELIUM DISC OIDEUM WU Xiaoxia1 1,2,* * 1,2 1 3 ，LU Yinghua ，LI Qingbiao ，DENG Xu and XU Zhinan 1 ( Depar tment of Chemical and Biochemical Engineering, Xiamen University, Xiamen 361005, Fujia n, China; 2 Key Laboratory for Chemical Biology of Fuj ian Province, Xiamen University, Xiamen 361005,Fujian, China; 3 Institute of Biochemical Engineering, Depar tment of Chemical and Biochemical Engineering, Zhejia ng University, Hangzhou 310027, Zhejian g, China ) Abstract Dictyo