间接免疫酶组织化学检测雏鹅人工感染鹅细小病毒后病毒在体内动态分布规律的研究(1)研究.pdfVIP

家禽传染病 间接免疫酶组织化学检测雏鹅人工感染鹅细小病毒后病毒在体内动态 分布规律的研究 周春宇1,2，程安春1,2．·，汪铭书1,2 动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 雅安625014；2．四川农业大学动物科技学院禽病防治研 究中心，四川雅安625014) 摘要：通过皮下注射和口服感染1日龄未免疫GPV雏鹅，分别在不同的时间段内剖杀取心、肝，脾、 肺、肾、大脑、肌肉、食道、腺胃、十二指肠、盲肠、空肠、回肠、直肠、胸腺、胰腺、法氏囊，利用已 建立的间接免疫酶组织化学法对所取的组织进行检测。结果显示皮下注射和口服感染组分别在感染后8～ 576h内的不同时间点从心、肝、脾、肺、肾、大脑、十二指肠、盲肠、空肠、回肠、直肠、胸腺、胰腺、 法氏囊十四种组织器官中检测出病毒抗原。病毒抗原主要分布在细胞核，少部分分布于细胞浆。两个试验 组的鹅在感染后4h、50d均不能从体内检出病毒抗原。经不同途径感染后．皮下注射感染斤96h病毒在机 体内各组织的分布最为广泛．而口服组感染后144h病毒在机体内各组织的分布最为广泛。在检测的组织 中肝脏的检出率晟高，但均未能从肌肉、腺胃、食道中检出病毒抗原。 关键词： 间接免疫酶组织化学法，鹅细小病毒，动态分布规律 Parvovirus 鹅细小病毒感染(Goose Infectious，GPI)俗称小鹅瘟，是由鹅细小病毒(Goose parvovirus， GPv)引起雏鹅和雏番鸭以急性肠炎及肝、肾、心等实质器官炎症的一种急性、亚急性高度接触性败血性 传染病”J。其传染性强，死亡率根据年龄不同而有差异，可高达100％。自1956年我国学者方定一首次报 道该病后，国内外相继有分离到该病毒的报道。近年来，鹅细小病毒病每年都有不同f2度的流行，造成相 当大的经济损失，引起了国内外学者的广泛重视。目前研究鹅细小病毒感染雏鹅的分布规律报道较少，主要 有病理学方法口J、PCR技术131等，这些方法用于研究病毒在雏鹅体内的分布规律时有其各自的优点，但却 不能用于GPV感染的组织器官和细胞的抗原定位检测和直观判断。由于免疫酶组织化学法 (1mmunoperoxidase Immunoperoxidase 法基础之上，利用该方法对本病进行系统的病原定位．探讨疾病的发生．发展规律及发病机理。 l材料与方法 ． 1．1材料 1．1．1试验毒株GPV-CHV强毒株由四川农业大学禽病防治研究中心分离保存。 1．1．2实验动物1日龄无GPV母源抗体的四川白鹅雏鹅100只，四川农业大学实验动物室提供。 1．1．3试剂：兔抗GPV抗体由四川农业大学禽病防治研究中心制备；免疫过氧化物酶染色剂和APES 4％多聚甲醛组织固定液。 (DS802104)购自华美生物工程公司；pH7．4 1．I．4主要仪器RM JAPAN)；NickonE400显微镜及数码显微照相系统(Nickon公司)。 1．2方法 1．2．1 h、12 状、病理变化及死亡情况。分别于接种后4h、8 两只。死亡鹅不计入当天剖杀组内。 1．2．2切片制备：动物剖杀后，采集心、肝、脾、肺、肾、肌肉、大脑、法式囊、胸腺、胰腺、食道、 腺宵、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠共17种组纵，用pH7．44％的多聚甲醛4℃固定48h，按常规病 814 第六次全国会员代表大会暨第11谈学术研讨会 理要求系列酒精脱水、包埋，以APES做粘片剂制备4Ⅱm的石蜡切片。每个组织器官作连续切片3张，2 张按已建立的程序1．2．3进行免疫组化染色，，另外一张做常规HE染色进行病变观察。 后，用3％的甲醇-H202 mol／L PH6．0柠檬酸缓冲液微波修复20min，洗涤方法与上 在空气震荡器里120rpm摇洗10min．2次：用0