水稻温敏不育基因定位及功能互补实验体系的建立研究.pdfVIP

摘 要 温敏不育水稻是一种重要的种质资源，其发现和应用使杂交育种从三系转为两 系成为可能，同时为水稻亚种间杂种优势利用创造了条件。温敏不育基因的克隆可 以使人们透彻了解温敏不育的机理，从而更好的利用该珍贵的种质资源。温敏核不 育系安农S-1是生产上重要的温敏不育基因源，由其转育的不育系配制的两系杂交 种已经在生产上广泛应用。本研究以安农S-1和正常品种安农N为材料，取花粉母 细胞时期至减数分裂时期的幼穗，利用抑制缩减杂交技术，构建了两种材料的差异 表达cDNA缩减文库，筛选和鉴定出了与温敏不育相关的cDNA片段，用该cDNA 片段为探针，筛选恢复系的基因组文库，所得阳性克隆经过酶切分析，包含目的基 因，用该TAC候选克隆转化水稻。 本研究取得的主要结果如下: 1.以正常水稻品种安农N和温敏核不育系安农S-1花粉母细胞至减数分裂期 幼穗为材料，利用抑制缩减杂交技术，构建差异表达的cDNA文库.筛选得到了50 个在两个品种间表达有差异的片段。没有发现安农S-1有表达，而安农N无表达的 片段。 2.用所得5。个cDNA片段为探针，组合31种限制性内切酶，分析安农N和 安农S-1之间的多态性。当用HpaII完全酶切亲本材料的基因组。NA时，cDNA克隆