陕西省常见四种实蝇的分子鉴定研究.pdfVIP

摘 要 实蝇作为一种有重要经济意义的有害生物类群，不仅对水果生产构成直接的危害， 而且对水果进出口贸易也造成严重的影响。目前，世界上危害果蔬类的实蝇达150余种， 且分布在不同的国家和地区，各国政府均采取了严密的检疫措施，以防止检疫性实蝇的 传播扩散。目前，实蝇的分类鉴定主要是以成虫的外部形态特征作为依据，但在口岸实 际检疫工作中.截获的往往是幼虫或蛹，通常的做法是对其进行室内饲养待获得成虫后 再进行鉴定，这样不仅延长了进出口物品的通关时间，而且增加了检疫人员的工作强度。 因此，对实蝇进行快速、准确的鉴定，无论是在口岸检疫上还是在防治上都具有重要意 义。木文利用RAPD技术和PCR方法在国内首次对实蝇的分子鉴定进行了研究，旨在 找到一种能准确、快速鉴定实蝇的方法，主要结果如下: 1、利用目前国内提取干标本DNA的多种方法，如CTAB法、SDS法等试验结果 表明，常规保存条件下，保存一年左右的干标本很难进行DNA的提取，不管采用何种 方法，大多数标本均不能提取到DNA;仅少数保存比较好的干标本.可以提取出DNA 并进行PCR扩增。而利用CTAB法、SDS法等方法对绝大多数保存在超低温冰箱中的 干标本都能提取到足量的DNA. 2、在多次筛选试验的基础上，优化了实蝇的RAPD体系，建立了一套稳定的实蝇 鉴定RAPD反应体系，为今后采用分子生物学技术进行实蝇鉴定奠定了一定的基础。 3、从69条引物中筛选出S361,S67和S252可以对南瓜实蝇、具条实蝇和三点棍 腹实蝇进行区别鉴定;S112引物可以对具条实蝇、桔大实蝇和三点棍腹实蝇进行区别 鉴定;5126和S134可以对具条实蝇和三点棍腹实蝇进行区别鉴定，S83可以对南瓜实 蝇的雌性和雄性进行鉴定。 4、利用3条扩增结果稳定、清晰的引物，每种实蝇用7个个体对4种实蝇的种内 稳定性进行了研究，结果表明南瓜实蝇、具条实蝇、桔大实蝇和三点棍腹实蝇的种内平 均相似系数分别为0.551,0.538,0.373,0.778，从相似系数可以看出三点棍腹实蝇种 内最稳定，其次为南瓜实蝇和具条实蝇，桔大实蝇种内分化最大。 5,用S61、S83,5107,5264,5265,S266,S271、5274,S275,S276,S1142, S合引等12条引物，每种实蝇用1个个体，对4种实蝇进行扩增，根据DICE遗传距 离聚类结果表明南瓜实蝇和具条实蝇先聚在一起。然后与三点棍腹实蝇聚在一起，最后 再与桔大实蝇聚在一起。用S61,S107,S126,5275,S1142等5条引物，每种实蝇用 3个个体.对4种实蝇进行扩增，用DICE和NEI遗传距离聚类结果表明南瓜实蝇和具 条实蝇先聚在一起，再与桔大实蝇聚在一起，最后它们3个与三点棍腹实蝇聚在一起。 这与传统分类所提出的亲缘关系完全一致。 6、通过扩增ITS，片段，成功的对4种实蝇进行了鉴定，其中南瓜实蝇扩增出的条 带大小为650bp左右，具条实蝇扩增出的条带大小为6406p左右，桔大实蝇扩增出的条 带大小为1010bp左右，三点棍腹实蝇扩增出的条带大小为773bp左右，该方法比RAPD 方法用的时间更短，整个过程可以在30个小时内完成，重复性好，可以在不同实验室， 不同PCR仪上进行重复。 本论文在国内首次利用两种分子标记对实蝇进行了鉴定，利用这两种方法对实蝇进 行鉴定快速、准确，从理论上来讲，不受虫态的影响，可以用于实蝇幼虫和蛹的鉴定， 而且在其他实蝇的鉴定中也具有一定的参考价值。 关键词:实蝇:RAPD;ITSi;分子鉴定;亲缘关系 ABSTRACT Fruitflies,akindoftheimportantpestinsectseconomically,makedirectlyaserious damageandhaveasignificanteffectsontheproductionandtradeofimportandexportof manyfurits.Therearemorethan150speciesoffruitflieswhichdamagefruitsand vegetablesindifferentcountry.Inordertoavoidtheintroductionoffuritflies,almosteach governmentadoptsaseriesofseriousquarantinemethods.Th