咔哇中肝毒性物质的发现及其作用机理的研究.pdf

4回国 1z3拳必}t}橄邑三E3 摘 要 咔哇中肝毒性成分的发现及其作用机理的研究 研究生: 刘吉华 专 业: 生药学 导 师: 余伯阳 教授 徐路珊 教授 摘 要 随着现代社会生活节奏的加快，失眠、焦虑、抑郁等精神疾病的发病率越来越高，已成为困 扰现代社会的严重问题。抑郁症、焦虑和睡眠失调等疾病已成为精神科常见病、多发病，具有高 患病率(约13%-20%)、高复发率(约70%-80%)、高致残率(约25%有躯体功能和社会功能 减退，50%为漫性病程)和高致死率(约15%-25%最终自杀成功)等特点。传统的合成抗抑郁、 抗焦虑药物由于常具有较严重的毒副反应、长期使用能产生耐药性和成瘾性等原因，已不能满足 现代社会防治焦虑、抑郁等疾病的需要，寻找新的具有高效低毒、不具成瘾性的防治抑郁、焦虑 等精神疾病的药物已成为社会的迫切需求。 咔吐 (PipermethysticumForsterf,Piperaceae)是南太平洋群岛土著居民的传统药物，其药 用部位咔哇根茎在斐济、瓦努阿图、玻利尼西亚和新西兰等地区用于治疗睡眠失调、焦虑、忧郁 等精神类疾病，有着2000多年的安全应用历史，其主要活性成分是咔哇内酷类成分。自从二十 世纪八十年代以来，咔哇在世界范围内广泛用于治疗各种精神类疾病。与同类药物相比，咔哇提 取物具有疗效显著、治疗剂量下不具有成瘾性、副作用小、耐受性好以及不影响人体正常神经活 动等特点，但是自1999年以来，人们发现在咔哇的现代使用中能导致严重的爆发性肝损害，并 己造成多人死亡，咔哇类药品因此被多数国家禁止出售。对咔哇引起暴发性肝损害的成分及其作 用机理，众多研究机构进行了大量的研究，但是到目前为止，其肝毒性成分及其作用机理仍不清 楚。鉴于咔哇类产品近年来在我国医药保健品市场上销售不断增加，为了保障我国消费者的用药 安全，探索传统天然药物在现代使用中出现严重毒副作用的可能机制，我们对咔哇的肝毒性成分 及其作用机理进行了研究，以期发现咔哇中的肝毒性成分及其作用机理。我们的研究工作包括以 下儿个方面。 印回仁匀田乞总娜游含掌琶腿自 摘 要 I.咔哇中肝毒性物质存在部位的确定 在长期的传统使用中没有发现咔哇会导致严重的肝损害，但是在现代使用中出现了严重的副 作用。为了寻找咔哇中的肝毒性成分主要存在部位，指导对咔哇中肝毒性成分的定向分离，我们 首先以培养正常人肝细胞L-02对咔哇传统提取物和现代有机溶剂提取物的细胞毒性进行了比较 结果显示，咔哇的传统水提取物在较高浓度 8〔00ag/ml)时对L-02细胞仍不表现出毒性作用， 而以有机溶剂提取的咔哇现代标准提取物在较低浓度 卜(400vg/ml),就对L-02细胞表现出显 著的细胞毒作用，证明肝毒性物质应该主要存在于咔哇中较弱极性的成分中。 2.咔哇提取物中肝毒性物质的发现 根据咔哇不同提取物肝细胞毒性的筛选结果，我们对咔哇有机溶剂提取物中的弱极性成分进 行了定向分离和鉴定。通过肝细胞毒性筛选，发现并确证了咔哇中的肝毒性成分，主要结果为: (1)从咔哇的甲醇提取物中分离出10个弱极性的化合物，鉴定出其中的7个化合物，分别 是咔哇内酷类成分 Desmethoxyyangonin,Dihydrokawain,Yangonin,Dihydromethysticin, Methysticin和咔哇黄酮类成分FlavokawainA,FlavokawainB, (2)以MTT法对分离的弱极性成分的肝细胞毒性作用进行了筛选，发现咔哇内醋成分 Desmethoxyyangonin,Dihydrokawain,Yangonin,Dihydromethysticin,Methystici。和咔哇黄 酮类成分FlavokawainA对培养正常人肝细胞L-02细胞没有明显的毒性作用{IC50200t3g/mi), 而咔哇中的黄酮类化合物FlavokawainB能显著抑制L-02细胞的增殖 (IC50=9.18Pg/ml)，表 现出很强的肝细胞毒性作用。而咔哇中的黄酮类成分一直以来都被认为是咔哇提取物中的有益成 分。 (3)选用止常人肝细胞L-02、人肝癌细胞