PNP基因克隆及其表达载体的构建与鉴定.pdfVIP

摘要 摘要 目的：研究PNP基因的克隆、真核表达载体的构建与鉴定，为肿瘤的 基因治疗与基因工程的应用提供实验和理论依据。 方法：①大肠埃希氏杆菌K12PNP基因的PCR扩增；②重组质粒 大肠杆菌，同时设立阳性对照组和阴性对照组。转移适量转化菌于平皿培养， 筛选氨苄青霉素抗性转化菌落；⑤提取质粒和酶切重组质粒：提取重组质粒 pMSCV-PNP，限制性内切酶EcoRII双酶切重组质粒，电泳鉴定； I和Bgl ⑥PCR鉴定、测序鉴定重组质粒pMSCV-PNP⑦提取质粒和酶切质粒：限 II、Aft 制性内切酶BspHl、Bgl 电泳鉴定质粒。 泳结果与预期一致；③重组质粒pMSCV-PNP转化结果：实验组平皿上可见 近百个菌落，阳性对照组有数百个菌落生长，而阴性对照组则未见菌落生长； PCR鉴定、酶切鉴定，电泳条带与预期一致； ④阳性克隆质粒pMSCV-PNP 一致。 结论：①从大肠埃希氏杆菌K12中克隆到PNP基因；②构建了表达载 关键词：PNP克隆；