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* 膨胀床吸附技术 膨胀床吸附 1.膨胀床与传统固定床的区别 2.膨胀床与流化床的区别 膨胀床与传统固定床的区别在于： 膨胀床的床层上部安装有可调节床层高度的调节器，当液体(料液或清洗液等)从床底以高于吸附剂最小流化速度的流速输人时，吸附剂床层产生膨胀，高度调节器上升，膨胀床状态下床层高度一般为固定床状态的2—3倍，床层空隙率高，允许茵体细胞或细胞碎片自由通过。因此，膨胀床吸附操作可直接处理菌体发酵液或细胞匀浆液，回收其中的目标产物，从而可节省离心或过滤竿预处理过程，提高目标产物收率，降低分离纯化过程成本。这是膨胀床吸附操作的最大诱人之处。 膨胀床与流化床的区别： 膨胀床并非传统的流化床，两者的区别在于：后者的吸附型粒子和液体在床层内混合程度高，吸附效率低，而前者的吸附剂粒子基本悬浮于固定的位置，液体的流动与固定床相似，接近平推流，吸附效率高。因此，膨胀床的形成需要特殊的吸附剂和设备结构。 操作流程 缓冲液膨胀：首先确定适宜的膨胀度，使介质颗粒在流动的流体中分级。一般认为，流速为100-300cm/h，使床层膨胀到固定床高度的两倍时，吸附性能最好； 进料吸附：利用多通道恒流泵，将缓冲液切换成原料液，根据流量计中转子的位置和床层高度的关系调节流速，保持恒定的膨胀度进行吸附，通过对流出液中目标产物的检测和分析，确定吸附终点； 洗涤：在膨胀床中，用具有一定黏度的缓冲液冲洗吸附介质，既冲走滞留在柱内的细胞或细胞碎片，又可洗去弱吸附的杂质，直至流出液中看不到固体杂质后，改用固定床操作； 洗脱：采用固定床操作，将配制好的洗脱剂用恒流泵从柱上部导入，下部流出，分段收集，并分析检测目标产物的活性峰位置和最大活性峰浓度。 再生和清洗：直接从浑浊液中吸附分离、纯化目标产物如蛋白质时，存在有非特异性吸附，虽经洗涤、洗脱等步骤，有些杂质可能还难以除净。为提高介质的吸附容量，必须进行清洗使介质再生，一般在使床层膨胀到堆集高度5倍左右时的清洗液的流速下，经过3小时的清洗，可以达到再生的目的。 蛋白质在膨胀床吸附层析剂的 静态和动态吸附性能① 胡洪波② 　姚善泾③ 　朱自强 (浙江大学化工学院生物化工研究所, 杭州310027) 以牛血清白蛋白(BSA) 为目标蛋白, 考察膨胀床用离子交换树脂Streamline DEAE 的静态和动 态吸附性能, 并和离子交换树脂DEAE Sepharose FF 进行比较, 实验发现两者的静态吸附性能相似, 而动态吸附性能差别较大。根据动态吸附数据计算出液膜扩散系数和孔内扩散系数。 　 膨胀床吸附层析技术自90 年代被开发以来,由于在减少操作步骤, 提高产品收率, 降低纯化费用和资本投入方面的优势, 因而在生化分离中的应用越来越广泛[1～7 ] 。St reamline DEAE 是Amersham PharmaciaBiotech 公司专门为膨胀床设计的弱阴离子交换层析介质, 与常用的离子交换层析剂不同的是, 它有一惰性石英砂内核, 6 %的交联琼脂糖被包在石英砂核外, 并且其密度和粒径有一分布。在利用该层析剂进行分离时, 研究静态和动态平衡吸附行为可以为考察层析剂对产物的吸附量和研究层析过程的传质速率, 提供一些必要的参数。由于目前尚无计算具有粒径分布且含惰性内核吸附剂的吸附动力学模型和方法, 给描述动态吸附过程带来了困难。本文拟以BSA 为目标蛋白, 研究其在St ream2line DEAE 上的静态和动态吸附性能, 并与另一种层析剂DEAE Sepharose FF 的吸附性能进行比较,试图建立起蛋白质在含惰性内核层析剂吸附性能的数学模型, 计算吸附过程的平衡热力学参数和扩散系数。 　实验材料及方法 1. 1 　实验材料 BSA : 华美生物工程公司; DEAE Sepharose FF , St reamline DEAE : 瑞典A. Pharmacia Biotech 公司; 低温恒温槽: 宁波市机电工业研究设计院; UV - 1 紫外检测仪: 瑞典A. Pharmacia Biotech 公司。 1. 2 　实验方法 1. 2. 1 　蛋白质含量的测定 BSA 用紫外分光光度法分析, 波长为280nm。 1. 2. 2 　静态吸附性能 用缓冲液配制8. 0 mg/ mL 的标准BSA 溶液, 把其稀释成不同浓度的溶液, 取各浓度溶液 15mL , 置于25mL 具塞锥形瓶内, 加入1mL 与缓 冲液1∶1混匀的吸附剂, 置于恒温水浴16～17h , 让其达到平衡。将溶液离心, 取上清液, 测定 BSA 的浓度, 再根据物料衡算求得吸附剂吸附的 BSA 量。 1. 2. 3 　动态吸附性能研究 动态吸附实验装置如图1 所示。将吸附池置于 恒温水浴中, 由一恒流泵连接吸附池和紫外检测 仪。