广东省猪圆环病毒2型的流行病学调查.pdfVIP

丫 665521 摘要 猪圆环病毒2型 (Porcinecircovirus2,PCV-2)引起的几种疾病对全世 界养猪业造成的经济损失不可估量。 本文通过建立的PCR方法，对广东省猪圆环病毒2型的流行情况进行了调 查，同时从送检的病料中分离到3株猪圆环病毒2型，并进行了鉴定。最后对 广东市场上销售的猪用弱毒疫苗进行了猪圆环病毒2型的检测。 1.根据GenBank发表的PCV-2序列，利用软件设计了一对引物，对可疑 病料进行PCR扩增。将PCR产物连接到pMD18-T载体，然后转化到大肠杆菌 DH5a，挑取白斑接种到LB液体培养基，37℃摇动12h，抽提质粒，并对重组 质粒进行PCR鉴定和酶切鉴定。同时还对建立的PCR方法进行了稳定性、敏感 性、可重复性、特异性等实验。通过一系列的实验，建立了猪圆环病毒2型的 检测方法。 2.从广东省养猪比较密集的地区117个大、小不同类型养猪场采集了 1170份病料，利用建立的PCR检测方法，对广东省猪圆环病毒2型的流行情 况进行了调查。在117个猪场中，有81个猪场为阳性 (69.23%),36个猪场 为阴性(30.77%)。其中东莞的阳性率最高，为87.5%，广州的最低，为58.3%0 对不同组织的检测比较中发现，腹股沟淋巴结在所有阳性猪场中检出率(100%) 最高，肝脏的阳性检出率最低(21.37%)。阳性猪群根据临床症状和病理变化可 以分为两种情况:断奶仔猪多系统衰竭综合症(Post-weaningmultisystemic wastingsyndrome,PMWS)和肾炎皮炎综合症 ((Porcinedermatitisand nephropathysyndrome,PDNS)。这两种情况的发病日龄、I庙床症状和病理变化 都有很大的区别，但是腹股沟淋巴结活体触摸时均明显增大、剖检时出现肿胀 和出血的变化却是一致的。 3.用建立的PCR方法，对两株来源不同的PK15细胞进行了扩增，扩增结 果发现，一株细胞污染了PCV-1，称为PCV-l-PK15;另外一种没有检测出PCV 两种基因型的任何一种，称为PCVfreePK15。选取3个来自不同地区经PCR检 I 测阳性的病料，经过研磨，无菌检查后，接种于PCVfreePK15细胞，经过摘糖 胺特殊处理30min，继续培养72h后，收集细胞反复冻溶3次后经盲传 12代 次，通过PCR方法和电镜观察方法鉴定，确认病毒分离物为PCV-2o 4.PCV-2为什么能在很短的时间广泛流行，现在还没有一个明确的答案。 由于PCV-2病毒不引起细胞病变，本实验假设现用的弱毒疫苗在制作过程中是 受到了PCV-2的污染，从而引起PCV-2的广泛流行。用建立的套式PCR(nested PCR)，对广东市场上销售的6种猪用弱毒疫苗共30份进行了检测，结果发现 所有被检疫苗均为PCV-2阴性，同时证明疫苗是安全的. 关键词:广东省;猪圆环病毒2型;流行病学调查 本论文常用英文缩写 A m 旧 AmpiciIIin 氨节青霉素 L 曰 n Basepair 碱基对 DNA Deoxyribonucleotideacid 脱氧核糖核酸 EDTA Ethylenediaminetetraacid 乙二胺四乙酸二钠 Gram 克 Hour 小时 IPTG Isoprophlthio-d-Dgalactoside 异丙基硫代一s半乳糖普 ‘ L n U Lauria broth LB肉汤 m g Milligram