基于荧光素酶报告基因HeLa细胞雌激素检测方法的建立及其在水产品检测中的应用 (1).pdfVIP

第3l卷 第 11期 分析测试学报 Vo1．3lNo．11 2012年 11月 FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis) 1455～1459 基于荧光素酶报告基因HeLa细胞雌激素检测方法 的建立及其在水产品检测 中的应用 卢安根 ，黄志标，杜寒春 ，莫建光，黎 颖，阮志华 (广西分析测试研究中心 ，广西 南宁 530022) 摘 要：利用荧光素酶(Luciferase)报告基因检测技术，构建稳定表达人雌激素受体a(hERa)或人雌激素受 体 口(hERf1)的重组HeLa细胞株 (该细胞株无内源性激素受体)。通过培养已转入并能成功表达的包含雌激素 反应元件ERE的报告质粒pERE—Luc的HeLa细胞 ，用 17#一雌二醇 (E2)、己烯雌酚、孕酮处理后检测荧光 素酶的表达活性。Luc的荧光表达倍率与 E2、己烯雌酚 、孕酮标样浓度呈非线性关系，相关系数分别达到 0．8798、0．9550和0．9262。1．0x10 mol／L时E2可出现明显的兴奋效应，至 1．0×10 mol／L可达到最 大反应值，而未转染雌激素受体质粒与E2无明显反应。同时己烯雌酚和孕酮均可以表现雌激素样活性，浓 度大于 1．0x10 。mol／L，己烯雌酚表现雌激素样活性 ；浓度大于 1．0×10 mol／L，孕酮表现雌激素样活 性 ，表明孕酮的雌激素样活性高于己烯雌酚。使用浓度均为 1．0x10 。moL／L的E2、己烯雌酚、孕酮分别处 理，报告基因的发光均值分别为0．9474、0．3123和0．5796，相对标准偏差(RSD)分别为 13．7％、3．7％和 3．4％，证明上述3种物质对于荧光素酶报告基因表达活性的影响具有很好的重复性。运用同样原理检测草 鱼、带鱼、鲫鱼和鲷鱼鱼 肉中雌激素样物质 的含量，E2的加标 回收率均在 75％以上，RSD为 7．3％一 11．6％，精密度较好。该研究基于荧光素酶报告基因的体外雌激素样物质检测方法有效可靠。 关键词：HeLa细胞；雌激素；报告基因；荧光素酶；水产品 中图分类号 ：0657．3；Q57 文献标识码 ：A 文章编号：1004—4957(2012)11—1455一O5 doi：10．3969／j．issn．1004—4957．2012．11．021 EstablishmentofaReporterGene—basedAssayforIdentificationofEstrogenic CompoundsinHeLaCellsandItsApplicationinDetectionofAquatisProducts LUAn—gen ，HUANGZhi—biao，DUHan—chun，MOJian—guang，LIYing，RUANZhi—hua (GuangxiCenterforAnalysisandTestingResearch，Nanning 530022，China) Abstract：Basedonarecombinantcellstrainforhighsensitivitydetectionofestrogenicactivity，es- trogensynthesistechnologyisarevolutionarytechnoloyg ofthedetectionofthebiologicalefficacy．It hastheadvantagesofhighefficiencyandhighsensitivitycharacteristic．TheHeLacells(thecells withoutendogenoushormonereceptor)wereusedtorecombinethehumanestrogenreceptorot(hERa) orestrogenreceptor (hERf1)，andthenbuildastableexpressionofcelltodetecttheluciferasere— portgene．pERE—Lucplamidwasgeneratedbyinsert