3种石斑鱼微卫星标记的开发及跨种扩增.pdfVIP

摘要 摘 要 微卫星标记由于多态性高、共显性等特点被广泛应用于生物群体遗传结构 分析、遗传连锁图谱构建等方面。石斑鱼是重要的世界性海水养殖鱼类，然而 其遗传多样性的研究还十分有限。目前在石斑鱼中缺乏足够的微卫星标记。因 此，为了评估石斑鱼的遗传多样性，进行分子辅助育种以指导生产，迫切需要 septemfasciatus)、青石斑鱼(Epinephelus striata)的基因组微卫星富集文库，分离微卫星DNA序列并对其特征进行分析。 基因组DNA经Mse I限制性内切酶消化后，酶切片段与MseI接头连接，用生 物素标记的寡核苷酸探针与其杂交，杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁 珠上，变性洗脱获得单链目的片段，经PCR扩增形成双链，然后克隆到pMDl8．T 载体上，转化至DH5a中。菌落PCR法筛选阳性克隆，挑选不同大小的阳性克 隆测序(ABI3730)。从七带石斑鱼、青石斑鱼、美洲黑石斑鱼的基因组微卫星 的微卫星序列进行引物设计，分别得到55，36，28对引物。通过6％变性聚丙 烯酰胺凝胶电泳进行筛选，3种石斑鱼中分别得到12，12，11个多态性微卫星 标记，并对各个位点等位基因数目、等位基因片段大小范围、观察杂合度、期 望杂合度指标进行初步分析。结果表明：FIASCO法能有效提高微卫星标记筛选 效率。将研究所得到的多态性微卫星标记在这3种石斑鱼中互相跨种扩增。大 部分座位能得到较好的扩增结果。因此，可将本研究开发的微卫星标记尝试性 地用于其他石斑鱼的遗传多样性等研究，为石斑鱼基因组结构分析、标记辅助 育种以及数量性状基因的定位等研究提供候选微卫星标记。 关键词：七带石斑鱼；青石斑鱼；美洲黑石斑鱼；微卫星标记；FIASCO法； 跨种扩增 摘要 ABSTRACT Microsatellitemarkershavebeen usedtoassess broadly geneticpopulation of structure，construct andSOonbecausetheir of geneticlinkagemap hi曲level andCO—dominant ofthe Epinephelus， polymorphism inheritance．Groupersgenus oneofthe marineculturedfisharound familySerranidae，areeconomicallyimportant to the informationon isstilllimiteddateandthere world．However,geneticgroupers markersin microsatellite arenot microsatellite enough polymorphism groupers．More markersareneeded inordertoassessthe ofthe urgently geneticdiversitygroupers and theoreticalandtechnicalfoundationformolecu