DotPPAELISA联合检测猪瘟、猪链球菌和猪巴氏杆菌抗体方法的建立.pdfVIP

摘 要 抗体，并进行了较大规模田间猪血清检测。试验对诊断膜片及关键材料做 了细致研究，确定了联合诊断的最佳反应条件。制各的膜载抗原灵敏性高， 相应血清2do仍可检出；特异性强，不与猪其它疾病血清发生交叉反应；稳 定性好：经批内三次检测10份猪血清、批间6批检测18份猪血清，T检验， 性不变。试验确定1：80、l：16、l：16分别为联合检测猪瘟、猪链球菌 差异不显著；检测猪链球菌抗体用微量凝集作对照(血清用原液)，两者符 合率84．4％，差异显著。试验结果表明诊断膜片便于运送、保存，性能稳定， 便、快速，结果客观，易于判读，适宜子猪瘟、猪链球菌、猪巴氏杆菌免 疫抗体的联合检测、疾病诊断及流行病学调查。 ISA 关键词：Dot—PPA—EL联合检测 抗体 应用 引 言 研究概况： 1．1猪瘟概述 cholera 猪瘟(Hog HC)是猪的一种高度接触性传染病，由黄病毒科，瘟病毒属 的猪瘟病毒引起。该病毒为线性单股正链RNA。基因组大小约12．3kb，病毒粒子呈二 十面体。猪是该病的唯一自然宿主f”，感染后除可对猪中胚层组织，特别是造血和血管 组造成损害，引起败血症91,t2s，还可弓l起妊娠母猪流产、胎儿畸变、慢性营养性消耗、 白细胞和血小板减少等免疫系统受损、继发或并发细菌或其它病毒感染等131。 HC于1833年首先发现于美国的俄亥俄州，1903年De 猪瘟的病原体是病毒f”，此后世界各地都有关猪瘟的报道。1984年国际兽疫局(OIE) 将HC列入A类16种法定传染病之一，定为国际检疫对象，我国亦将之列为一类动物 传染病嗍。 1．2流行情况 鉴于HC的危害，许多国家制定和执行猪瘟的防制和根除计划，并在欧美20多个 国家取得成功。目前猪瘟在世界上主要分布于亚洲、欧洲、南美洲和远东的40个国家 和地区14l，但近年来HC流行和发病特点已发生了很大变化，呈现周期性波浪形的地区 性散发流行。在国外。一些原宣布已消灭HC的国家(如比利时、德国、荷兰等)又爆 发HCl6】；在我国，80年代后，疫点虽减少，但猪瘟流行范围广，散发流行，发病年龄 小(多见于3月龄以下)，免疫力低下，病程延长，以温和型猪瘟和母猪持续感染引起 的流产、死胎、新生仔猪死亡为主要特征，呈现典型猪瘟和非典型猪瘟共存、持续感染 与隐性感染共存、免疫耐受和带毒综合征共存等，有的将疫苗剂量加大数倍或数十倍疫 情依然不能控制，甚至还因注射疫苗而引发猪瘟17]。虽然我国进行广泛疫苗接种，猪瘟 得到基本控制，目前发病率总体较低(3％)，但我国养猪基数大，总损失仍不可忽略。 尽管发达国家所采取严格卫生防疫措施和剔除猪瘟感染猪净化猪群来控制和消灭猪瘟 的做法与多数发展中国家采取大规模免疫接种所付出的代价相比具有一定优势，但一旦 爆发猪瘟则损失惨重。(荷兰1997--1998年间由于精液感染猪瘟病毒丽引起猪瘟爆发， 经济损失达20亿美元吼) 1．3血清型 猪瘟病毒只有一个抗原型，但研究发现HCV具有血清学变种。法国认为至少有两 2 个血清学亚组：I组包括许多强毒株和绝大多数的疫苗用弱毒株，II组包括引起慢性猪 瘟的低毒力毒株，如美国331株(低毒株与弱毒疫苗株不同，不能产生明显的血清中和 序列比较、中和单抗反应性及内切酶分析，将HCV也划分成2个群(或血清亚型)。血 株为代表；HCV-3与上述2个群均有较大差异，包括日本、泰国和中国台湾等地70—90 年代流行毒株。国内通过对HCVE2基因中主要抗原位点编码区扩增研究，将HCV分 为2个基因组(或基因群)。我国流行毒株中78．26％属基因II组，而传统石门系强毒、兔 化弱毒株以及其它流行株占21．74％，属于基因I组。两组间测序区核酸同源性只有 78 9％。这表明HCV流行株与传统强毒株、疫苗用弱毒株在抗原基因上存在较大差异， 流行毒已呈远向疫苗毒方向演变(流行毒与古典HCV之间核酸和氨基酸同源性分别为 84 2％一84 3％和87．90／0-．90．4％)。但中国兽药监察所用国产兔化弱毒茁免疫后用不同强 毒攻击，猪只均获保护19】，说明兔化弱毒疫苗对预