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中文摘要 megsin对糖尿病小鼠肾组织P27表达的影响 摘 要 目的：随着人们生活水平的提高和人口的老龄化，糖尿 病(diabetes (diabetic 期肾衰竭肾脏替代治疗的最常见原因。因此，在细胞分子水 平以及基因水平探索DN的发病机制十分重要。 系膜细胞在维持肾小球的结构和功能方面起着重要的 作用，并且参与了多种肾小球疾病的致病过程。糖尿病肾病 的病理基础为系膜细胞肥大和系膜细胞外基质积聚，是引起 肾脏肥大、细胞外基质(ECM)增多并进一步导致肾小球硬化 的重要原因。 Megsin基因是从人类系膜细胞中分离出的一种新型基 因，它在人、大鼠、小鼠系膜细胞中呈优势表达，主要在人 类肾脏系膜细胞中表达，属于丝氨酸蛋白酶超家族(serpin) 的一员。文献报告人类IgA肾病和糖尿病肾病及大鼠抗Thy．1 肾炎的病变均表现为系膜细胞增殖和或系膜基质扩增，其致 病机理和病变程度与megsin的表达水平是相关的，表明 megsin表达可能通过介导细胞外基质的沉积和细胞生命周 期参与肾小球硬化的过程。 糖尿病时肾组织细胞周期异常不仅启动糖尿病肾病(D№ 的发生而且也参与疾病进展。 p27kipl基因是一个调控细胞周期并抑制细胞分裂的重 要基因，主要与细胞周期素(cyclin)结合而发挥对细胞周期素 中文摘要 kinase， ．细胞周期依赖性蛋白激酶(cyelin．cyelindepedent l是近年来研究较多的细胞周期抑 CDKs)的抑制作用。p27kip kinase 制剂(cyclindepedent 的cyclin．CDK复合物的激酶活性，对细胞周期起负调控作用。 研究表明，p27kipl对于肾小球疾病中系膜细胞的肥大及肾 脏肥大起着重要作用，其主要功能是作为CDK抑制因子参 高，当细胞进入S期时表达下降，若某种因素刺激导致p27 在系膜细胞中表达增高，则可使细胞周期停滞于G1期，导 致细胞肥大。研究证明肾小球系膜细胞受不同因素作用后 P27表达水平不同，说明P27在调节系膜细胞增值过程中起 重要作用。P27在正常的静止期系膜细胞中呈结构性表达， 体内实验中系膜细胞增殖也与p27蛋白表达水平密切相关， 而且鉴于P27在调节系膜细胞增殖中的重要作用，许多研究 亦将其作为抑制系膜细胞增殖的作用靶点，且通过某些直接 或间接干预措施，上调或抑制P27蛋白的表达水平，从而达 到抑制系膜细胞增殖或肥大的作用。 糖尿病小鼠模型，并通过尾静脉质粒注射法，将megsin质粒、 内，以此分成三组，采用单侧肾切除组为正常对照组，观察 不同组肾脏病变的程度，并采用免疫组化方法检测不同组 平，从而探讨megsin参与调节肾小球系膜细胞增殖乃至细胞 中文摘要 周期调控的机制，为阐明DN的发病机制及寻找先进的治疗 方法提供实验性理论依据。 方法：选择清洁级健康雄性CD．1小鼠60只，体重(20～ 309)克，首先行单侧肾切除，后随机分为4组，每组15只， 随机抽取3组腹腔注射STZ(溶于O．1mol／L柠檬酸缓冲液， 小鼠模型，剩余15只做为正常对照组(A组)。48小时后测定 血糖、尿糖，血糖≥16．7mmol／L且尿糖卅～什抖确定为糖 尿病小鼠模型。然后采用尾静脉质粒注射法，将megsin质粒、 岛素及其它降糖药物。分别于实验开始后1、2、12周各组 任取5只小鼠测定肾重／体重、血肌酐(Set)、24小时尿蛋白 定量，然后处死，留取肾组织标本行HE染色，免疫组化染 法检测肾小球裂解液P27的蛋白表达水平。结果应用图像分 析系统进行半定量分析。 结果： 1．一般情况 B组、C组、D组大鼠注射STZ后4～5天即出现多饮、 多食、多尿，逐渐消瘦，三组并无明显差异，而A组则无上 述情况出现。 中文摘要 直明显升高，C组和B组相比，差异无显著性(PO．01)。 3．病理组织学改变：光镜下观察，A组