Megsin对糖尿病小鼠细胞外基质代谢的影响及机制研究.pdfVIP

中文摘要 Megsin对糖尿病小鼠细胞外基质代谢的影响 及其机制研究 摘 要 目的：当前糖尿病肾病(Diabetic 为导致终末期肾病维持性透析的主要病因，给家庭和社会带 来了沉重的经济负担和精神压力。糖尿病肾病主要病理特征 究发现的一种在肾小球系膜细胞优势表达基因，其表达产物 属于丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease witha 因此而命名(mesangialcell—predominantgene homology to 系膜细胞和基质增生密切相关，而糖尿病状态下megsin表达 如何，在糖尿病肾病的发生、发展过程中起何作用，目前尚 缺乏相关报道。 肾小球细胞外基质的主要成分为IV型胶原、层粘连蛋白 这些成分不断更新，处于严格控制的动态平衡中。参与肾脏细 胞外基质代谢的酶类主要为丝氨酸蛋白酶系统(纤溶酶原激 活物．纤溶酶系统)和基质金属蛋白酶系统，细胞外基质合成 或降解出现异常及其成分的数量或组成发生改变，都将影响 肾脏固有细胞的功能，导致肾脏疾病的发生、发展。基质金属 谢的一个重要的降解系统，包括明胶酶、间质胶原酶、基质溶 中文摘要 素、弹力蛋白酶以及分泌型和膜型MMP等，它们的活性均依 赖锌离子，活化的基质金属蛋白酶可以协同地降解多种ECM 成分，其中MMP．2、M^佃一9是起关键作用的酶。先前的实验 研究表明，在megsin转基因小鼠的抗肾小球基底膜肾炎模型 中，病理显示有持续细胞外基质扩增，高度提示megsin作为 功能性的丝氨酸蛋白酶抑制剂在基质代谢调控中发挥了重 见的激活剂，可以直接降解细胞外基质成分，megsin可以与 纤溶酶结合，直接抑制其降解LN、FN及明胶的作用，并且 可以间接阻断纤溶酶对基质金属蛋白酶系统的激活作用，从 原的作用受阻，但是尚需要深入的研究证实。 糖尿病CD．1小鼠模型，并采用尾静脉注射方法导入megsin 质粒、空质粒和megsin 达和抑制状态下糖尿病小鼠肾脏组织中基质金属蛋白酶 胶原表达水平的变化，探讨megsin基因在糖尿病小鼠肾脏肾 小球细胞外基质代谢过程中的作用机制，为人类糖尿病肾病 的早期防治提供实验性理论依据。 方法：清洁级健康雄性12周龄CD．1小鼠，共60只， 方法制备糖尿病小鼠模型，48小时后测定血糖、尿糖，血糖 ≥16．7mmol／L且尿糖持续阳性确定为糖尿病小鼠模型，随机 将检测成模的45只糖尿病小鼠分为糖尿病+空质粒导入组 中文摘要 15只小鼠作为正常对照组(A组)，采用尾静脉注射导入质 粒载体，每周注射1次，整个实验期间小鼠自由饮食，不使 用胰岛素及其它降糖药物。于实验开始后12周末收集血、 尿及肾组织标本，检测血肌酐、24h尿蛋白定量及肾重／体重 比值；石蜡切片行HE和免疫组化染色，肾组织蛋白用 数4-标准差(4-s)表示，组间差异性比较采用单因素方差分 所有数据进行统计学处理。 结果： 1各组小鼠24小时尿蛋白定量、血肌酐及肾重／体重比 值的比较 糖尿病小鼠成模4,-一5天后即出现多饮、多食、多尿表 现，而A组则无上述情况出现。12周末B组小鼠尿蛋白定 量、血肌酐和肾重／体重比值升高(PO．05)，C组升高更 低(PO．05)。 2病理组织学改变HE染色可见A组小鼠肾小球结构 基本正常，1周和2周末B组‘肾小球固有细胞数目较A组明 膜基质增多；12周末B组肾小球固有细胞数目较A组略有 增多，但差异无显著性，C组较B组细胞数目减少(PO．05)， 伴有肾小球肥大；D组肾小球固有细胞数目少于同期C组差 中文摘要 异有显著性(P0．05)。 3免疫组织化学结果1周和2周末B组小鼠肾组织中 高，MMP．2水平进一步降低，12周末变化趋势更显著(P B组和C组增强(P0．05)。 4Western Blot结果