p53基因的克隆、原核表达及功能初步研究.pdfVIP

论文题目： p53基因的克隆、原核表达及功能初步研究 学科专业： 动物学 学位申请人： 李春炎 指导老师： 李兴玉教授 摘要 目的原核表达P53重组蛋白，检澳t]P53重组蛋白对人类白血病细胞系K562和人肝 质粒导,KBL21菌株中p53基因的存在，并在IPTG的诱导下，大量产生外源基因产 物。通过Ni．NAT亲和层析柱纯化分离P53蛋白，SDS．PAGE确定该蛋白准确性。 蛋白对靶细胞增殖的影响。利用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察经磁性荧光纳 米粒子修饰的P53重组蛋白在细胞中的定位。结果1．成功的构建了含人野生型 p53基因的原核表达载体，分离纯化了P53重组蛋白。2．磁性荧光纳米粒子修饰的 P53重组蛋白较未修饰的蛋白有更好的凋亡诱导作用，且磁性纳米粒子本身并不 具细胞毒害作用；3．P53重组蛋白抑制l(562肿瘤细胞的生成，随药物剂量增大： 度的增加，SMMC．7721细胞存活率显著降低，并发现该蛋白能促进肿瘤细胞凋 聚集显微镜观察发现P53重组蛋白主要定位于细胞核，胞浆也有少量分布。结论 并促使它们发生凋亡。 关键词：p53基因； 细胞凋亡； 磁性荧光纳米粒子 and of and Prokaryotic Title：Cloning Expressionp53genePreliminary ofIts StudyFunction Major：Zoology Application：LiChun-yan Supervisor：Prof．LiXing-yu Abstract To and fusion and theeffects Objective expresspurifypET—p53 proteininvestigate ofthe onthe ofHuman cell protein proliferationleukemialineK562andHuman carcinomacelllineSMMC-7721／nvitro．MethodsThe of hepatocellular fragment humanwild eDNA was PCRandthe of typep53 amplifiedby expressionplasmid wasconstructed．Recombinant pET-p53 weretransformedintoE．coli plasmids inducedIPTGat The BL21，then by lmmol／L was thecolumnof proteinpurifiedby Ni—NATand SDS．Aftertreatedwithfluorescent analyzedby magnetic P53 withdifferent nanoparticles(FMNP)modified protein ofK562weretestedMTr