PD98059对HL60细胞RasMEK12ERK12信号转导影响的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 影响的研究 刖 吾 急性早幼粒细胞白血病(acute leukemia，APL)亦称急性髓细 promyelocytic 胞白血病(acute myelogenous 基因(维甲酸受体基因)形成PML．RARGt融合基因，这是APL发病的关键机制， 但并非是唯一机制。近来研究表明PML—RARa转基因小鼠同时发生FLT3(一种 Ⅲ型酪氨酸蛋白激酶型受体)突变可以导致小鼠快速发生APL，提示Ra引MEKl／2 extracellular kinasel／2，丝裂原活化细胞外调节激酶) (mitogen．activatedregulated kinasel／2，细胞外信号调节激酶)信号转导途 ．ERKl／2(extracellularsignal．regulated 径的异常在APL发生中也起到重要作用。 酸激酶和胞浆蛋白激酶级联反应，在多种肿瘤组织与细胞中检测到该途径的异常 对ERKl／2的磷酸化活化，导致G0／G1期阻滞，促进细胞凋亡。鉴于此，我们以 号转导的影响及其作用机制，以期为白血病的基础研究和临床治疗探寻一条新途 径。 目 的 Ras-MEKl／2．ERKl／2信号转导以及细胞增殖的影响。 材料和方法 一、细胞系 HL60细胞，由中国医科大学遗传实验室惠赠 二、试剂 国医学科学院工程研究所；二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、碘 Free H20)、 化丙锭(PI)均购自Sigma公司；M—MLV、DEPC处理水(Rnase Ribonucleaseinhibitor(HPR—I)、dNTP、ExDNA d(T) Taq、DL2000Marker、Oligo Primer均购自TaKaRa公司；RT-PCR引物由TaKaRa公司合成。 三、试验方法 1、细胞培养 和湿度的培养箱中培养：每48h换液一次。 2、MTT法测定HL60细胞生长的抑制情况 收集对数生长期的HL60细胞，无血清培养液培养12h，以6×10恤接种于 150I．tl，震荡均匀后酶标仪上测定490rim波长处吸光度(A)值。 3、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期 对数生长期的HL60细胞，无血清培养液培养12h，1x105／ml接种于培养瓶， 4C避光染色30min， 洗涤2次，4C70％乙醇固定过夜，4CPBS洗涤2次，PI 流式细胞术检测凋亡、G0／G1期细胞的比率。 对数生长期的HL60细胞，无血清培养液培养12h，1x105／ml接种于培养瓶， 2 1 量检测ERK2、Skp2、p27基因表达水平的改变。 四、统计学处理 实验数据用黜表示，采用统计软件SPSSl5．0进行统计学分析。 结果 一、PD98059作用HL60细胞后细胞的生长情况 作用时间的延长，其对HL60细胞的抑制作用增强，但48h较24h差异无统计学 同浓度组与对照组以及各浓度组之间差异显著(P0．05)。 二、PD98059对HL60细胞凋亡和细胞周期的影响 差异显著，并且浓度相同时，随着PD98059作用时间的延长凋亡增加，而作用时 (P0．05)。 表达增加，差异具有显著性(PO．05)。 讨论 Ras-MEKl／