2018年高中生物 专题五 DNA和蛋白质技术课件 新人教版选修1.pptVIP

四个亚铁血红素基团 特点： 每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白有血红素呈红色。 两条α－肽链、 两条β一肽链 组成： 3、血红蛋白由哪些成分组成？有什么特点？ 专题5 DNA和蛋白质技术 考纲要求： 1、蛋白质的提取和分离 2、PCR技术的基本操作和应用 课题1 DNA的粗提取与鉴定 （一）提取DNA的方法 DNA提取的原理 一、基础知识 DNA在NaCL溶液中的溶解度曲线 （1）DNA在不同浓度NaCL中的溶 解度不同，0.14mol/L最小， 2mol/L的NaCl溶解DNA。加水 稀释降至0.14mol／L时析出。 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 某些蛋白质溶于酒精，DNA析出 蛋白酶： 高 温： 洗涤剂： ⑵ DNA不溶于酒精溶液 水解蛋白质 多数蛋白质不能忍受60～80℃，DNA在80℃以上才会变性 瓦解细胞膜，对DNA无影响。 （二）DNA鉴定的原理 沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色 二、实验设计 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 选取DNA含量较高的生物材料 注意安全，环境保护，不用珍稀濒危生物 动物细胞 蒸馏水 植物细胞 洗涤剂 食盐 所用溶液 目的 细胞吸水胀破 溶解细胞膜 溶解DNA （都要搅拌） 提取的DNA少，看不到丝状物，鉴定无蓝色 植物材料研磨不充分，结果会怎样？ 滤液中可能含有哪些成分？ 核蛋白、多糖和RNA等杂质 （三）除去滤液中的杂质 １、方案一为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除 杂质？ 高盐溶液溶解DNA　 除高盐不溶的杂质 除溶于低盐的杂质 低盐溶液析出DNA ２、方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案三：用DNA和蛋白质对高温耐受性不同， 蛋白质变性，与DNA分离。 （四）DNA的析出与鉴定 析出 加与滤液等体积的冷酒精(体积分数95％)，静置2－3min，出现白色丝状物。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，用滤纸吸干水分。 将处理后的溶液过滤 方案二：蛋白酶分解杂质蛋白 鉴定 二苯胺、沸水浴、设置对照 2、加入洗涤剂后，动作轻缓、 柔和，否则产生大量的泡 沫。加入酒精和玻璃棒搅 拌时，动作轻缓，以免加 剧DNA分子的断裂。 三、操作提示 1、以血液为实验材料时，加 柠檬酸钠，防止血液凝固。 3、二苯胺试剂要现配现用。 四、结果分析与评价 2、如果不呈现蓝色，或实验结果不明显，可能的 原因有哪些？ 1、观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物， 说明什么？ 杂质较多 核物质没充分释放，如研磨不充分或蒸馏水少 多次搅拌，目的、操作方法不同，要注意区分 二苯胺现配现用 加入酒精时摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏； 蛋白质难度大。因易失活；空间结构、理化性质不同，无统一方法。 3、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取 DNA一样容易吗？ 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片断 体外迅速扩增DNA片段的技术 1、什么是多聚酶链式反应（PCR）？ 2、PCR技术有何意义？ 3、PCR技术有哪些应用？ 解决样品中DNA含量太低而难以分析研究的问题 遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆、DNA序列测定等。 课题背景 一、基础知识 （一）PCR原理 条件 组分 作用 模板 原料 酶 能量 DNA两条单链 四种脱氧核苷酸 解旋酶 DNA聚合酶 ATP 一小段DNA或RNA 提供复制模板 合成子链的原料 打开DNA双螺旋 催化合成DNA子链 为解旋和合成子链供能 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 1、DNA分子复制需要哪些基本条件？有何作用？ 引物 2、DNA复制为什么需要引物？ DNA聚合酶不能够从头开始合成DNA，而只能从3’端延伸DNA链。 A A A T T T G G G G C C C C …… …… 5’端： 3’端： 5’端 3’端 反向平行 DNA的羟基（—OH）末端 磷酸基团的末端 当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后， DNA聚合酶就能从 开始延伸DNA链， DNA的合成方向总是从 向 延伸。 引物的3′端 子链的5′端 3′端 引物 母链的3′端 缓慢冷却复性（55 ℃） 加热变性（80～100℃） 3、双链的解开是DNA复制的前提，在体外如何打开DNA 的双螺旋结构? 利用DNA的热变性原理，通过控制温度来实现。 PCR仪 4、PCR技术中如何解决高温使酶失活的问题？ 用耐高温的TaqDNA聚合酶。 5、PCR反应需要哪些条件？ 缓冲溶液、DN