土贝母苷甲对人鼻咽癌上皮细胞MAPK活性的影响研究.pdf

专业 海洋药物 土贝母苷甲对人鼻咽癌上皮细胞MAPK 活性的影响 刘姬艳* 马润娣 于立坚** 湛江海洋大学广东省海洋药物重点实验室 湛江 524025 中国 摘要 土贝母苷甲 下称苷甲 是从传统中药土贝母块茎中分离出来的一种三萜皂苷 丝裂 原活化蛋白激酶 mitogen-activated protein kinase, MAPK 信号转导通路在多种细胞生长分 化过程中发挥重要作用 本研究分别用放射自显影 液闪和蛋白质免疫印迹法检测 MAPK 的活性 探索苷甲对人低分化鼻咽癌上皮细胞株 CNE-2Z MAPK 活性的影响 结果表明 苷甲能快速激活MAPK 三种实验方法得到的结果一致 关键词 土贝母苷甲 丝裂原活化蛋白激酶 人鼻咽癌上皮细胞 土贝母 [Bolbostemma paniculatum Maxim. Franquet (Cucurbitaceae)]是一种传统中药 载于清代赵学敏氏编著的 本草纲目拾遗 古代用它的块茎来治疗乳岩 乳痈 乳腺增生 [1] 和瘰疬等疾患 临床上显示出明显的散结毒 消痈肿效果 四川省和陕西省的老中医用它 来治疗食道癌和胃癌 效果显著 但因恶心 呕吐等消化道副作用而限制了它的临床应用 我们从 1978 年开始从生药土贝母块茎中分离 纯化抗癌活性成分土贝母皂苷 并对其中得 率最高 1.9% 水溶性和稳定性较好的苷甲进行了较系统的研究[2 4] 证实它有强抗肿瘤[5] [6,7] [8] [9,10] 和抗促癌作用 此前我们发现苷甲有诱导肿瘤细胞分化 周期阻滞和凋亡作用 本 文以牛髓鞘碱性蛋白 Bovine myelin basic protein, MBP 为底物 根据30时MAPK可将其 磷酸化的原理 采用放射自显影 液闪和蛋白质免疫印迹法检测MAPK 活性 研究苷甲对 MAPK 细胞信号转导通路的影响 探讨其抗肿瘤作用的机制 1 材料和方法 1.1 苷甲 化学结构如图 1[11] 自土贝母块茎分离纯化 纯度98.5% 实验前定量称取 紫外 线照射无菌 无菌蒸馏水溶解 20冰箱保存备用 *在读硕士研究生 **于立坚 通讯作者 研究员 Tel:0759-2382424 E-mail:ywyj9578@ 1 Tubeimuside 1 Fig.1 Chemical structure of tubeimoside 1 1.2 试剂 超级无支原体新生牛血清购自杭州四季青生物材料有限公司 RPMI 1640 购自 HyClone 公司 [-32P]-ATP 购自北京市福瑞生物工程公司 Leupeptin Aprotinin ATP Na2 购自Amresco 公司 MBP Na VO 购自Sigma 公司 小鼠抗人单克隆抗体p-ERK羊抗小 3 4 鼠单克隆抗体IgG-HRP购自Santa Cruz公司 高分子量标准蛋白质购自上海西巴斯生物技术 开发有限公司 其余均为国产分析纯试剂 1.3 细胞培养 人低分化鼻咽癌上皮细胞株(human poorly differentiated nasopharyongeal carcinoma epithelial cell line CNE-2Z) [12] 广东医学院肿瘤研究室提供 以含体积分数为10 灭活超级无支原体新生牛血清 100 kU