斑马鱼HO1基因的表达特征及功能研究.pdfVIP

第38卷 第2期 水 生 生 物 学 报 Vo1．38。NO．2 2014年 3月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA M ar．． 2014 doi：l0．7541／2014．31 斑马鱼HO1基因的表达特征及功能研究 陶文庭 王琳琳 侯少丰 李 志2 桂建芳2 钟雪萍 (1．华中师范大学生命科学学院，湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室，武汉 430079； 2．中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术国家重点实验室，武汉 430072) 摘要：实验对血红素加氧酶 1(HO1)在斑马鱼发育中的功能进行 了研究。多重序列比对结果显示，斑马鱼HO1 与哺乳类、鸟类及其他鱼类的 HO1氨基酸序列的总体相似性为 44．1％一86．8％，血红素结合标签相似性为 87．5％一95．8％。对斑马鱼早期胚胎和成鱼各组织进行 RT-PCR检测，结果显示 HO1转录本母源存在，HO1 mRNA 的表达水平在尾芽期前较低，到咽囊期迅速上升并稳定在较高水平。HO1基因在斑马鱼成鱼多个组 织中均有表达，在肝脏、脾、鳃 、肾中的表达量较高。WISH结果显示，1101基因在斑马鱼胚胎的卵黄合胞 层、眼和血液中的表达量较高。利用超表达和基因敲降技术发现，注射HO1mRNA使HO1基因过表达对斑 马鱼早期胚胎发育无明显影响。注射 HO1MO使HO1基因表达抑制可导致斑马鱼胚胎出现发育迟缓、围心 腔水肿 、尾部消失等不同程度的畸形。HO1MO导致的斑马鱼胚胎发育异常可被 HO1mRNA 回复。利用 Real-TimePCR研究发现，H01基 因表达抑制可导致IGF1表达量显著下降，IGFBP1表达量显著升高。这些 结果表明斑马鱼HO1基因可通过调节IGF信号途径调控胚胎的正常发育。 关键词：斑马鱼；血红素加氧酶 1；表达特征；功能 中图分类号：Q344~1 文献标识码：A 文章编号：1000．3207(2014)02—0209—07 血红素加氧酶(Hemeoxygenase，HO)是血红素 基因缺失男孩相似的病理反应[，]。此外，抑制大 降解 的起始酶和限速酶，可代谢血红素形成胆绿 鼠胎盘的HO1活性导致胎儿个体显著减小，妊娠大 素、一氧化碳(CO)和游离铁(Fe2+)。胆绿素被胞 内的 鼠转染 HO1基 因后胎儿 的体重 明显增加 ¨钔。 胆绿素还原酶进一步催化生成胆红素。HO通过催 Homxl 鼠仔存活率仅 20％，极少存活到成年的 化血红素降解产生的代谢产物在抗氧化、防御细胞 Homxl小鼠个体较对照小。这些结果显示，HO1在 凋亡、传递神经元信息和调节血管紧张度等方面发 人和脊椎动物的发育过程中可能发挥重要作用。 挥重要作用[1 】。HO在体 内有 3种 同工酶，H01、 目前，国内外研究主要探讨 了 HO1在疾病的 HO2和 HO3，分别由不同的基因编码 。研究表明， 发生、发展和临床治疗中的作用，而其在胚胎发育 HO2和HO3为结构型，HO1为诱导型。当细胞和组 中的作用机制尚不清楚。斑马鱼具有胚胎体外发育， 织处于应激状态时，HO1可作为保护性蛋白被诱导， 且胚胎透明的优势，可直接在体外观察其组织、器 以防御体内由细胞因子介导的细胞损伤[3一】。 官的生长，且便于基因操作 。利用斑马鱼这一理想 研究发现，在产前惊厥和胎儿宫内发育迟缓的 的发育和遗传研究模型，可系统地分析 H01基因 人类病人胎盘内HO1水平明显降低 ，9]oHO1基因 的生物学功能。在本文中我们研究了斑马鱼 HO1 缺失男孩生长发育异常，伴有贫血、组织性铁沉积、 基 因的时空表达特征，然后通过基 因过表达和敲 白血病，并且对氧化损伤 的敏感性增加，直至最后 降的方法初步研究了 HO1在斑马鱼胚胎发育 中的 死亡 【，¨】。大 鼠体内HO1水平降低也表现出与HO