大黄鱼微卫星标记的开发及其遗传方式分析.pdfVIP

第36卷 第6期 水 生 生 物 学 报 Vo1．36．N0．6 2012年 11月 ACTA HYDROBIOL0GICA SINICA NOV．， 20I2 D0I：10．3724／SP．J．1035．2012．01156 大黄鱼微卫星标记的开发及其遗传方式分析 叶 华 ，2 任 鹏2 刘 洋2 刘贤德2 王志勇2 (1．西南大学，鱼类繁育与健康养殖研究中心，重庆 402460；2．集美大学水产学院， 农业部东海海水健康养殖重点实验室，厦门 361021) 摘要：采用 FIASCO方法构建大黄鱼(Ac)微卫星富集文库，从文库中随机挑选 90个 白色克隆，经过菌液 PCR筛选得到 60(66．7％)个阳性克隆进行测序，其 中有 56个克隆(93．3％)含有 CA／GT重复数大于 5的微卫 星序列。56个微卫星序列中，二核苷酸微卫星 51个 (91．1％)，三核苷酸微卫星 5个；二核苷酸重复中有 48 个为(Ac)重复，占二核苷酸总数的 94．1％。根据 Weber的微卫星分类规则，完美型占 75．O％，非完美型占 8．9％，复合型微卫星占16．1％。共设计引物 52对，在 1个大黄鱼家系中35对引物所在位点具有多态性，28 个 (80．0％)位点子代基因型为 1：1：1：I(AB×CD／AB ×AC)分离类型，6个位点属 1：1分离类型，1个位点 属 1：2：1(AB×AB)分离类型。35个位点中有 32个位点的分离符合孟德尔分离比(P0．05)，另外 3个位点 YC0137、LYC0139、LYC0152)明显偏离 1：1或者 1：1：1：1的孟德尔分离比(P0．05)。本研究开发的微 卫星标记为大黄鱼微卫星遗传连锁图谱构建以及群体遗传学、分子进化和系统发育等研究提供了有用的分 子工具 。 关键词：大黄鱼；微卫星；孟德尔分离 中图分类号：Q173 文献标识~f-q：A 文章编号：1000—3207(2012)06．1156．08 大黄鱼(LarimichthysCFoceG)属于鲈形 目、石首 本文采用基于AFLP技术的FIASCO (FastIsolation 鱼科、黄鱼属，俗称黄花鱼、黄瓜鱼、黄鱼，是我国 byAFLPSequencesContainingrepeats)方法构建微 主要海洋经济鱼类之一，也是我国 目前养殖量最大 卫星富集文库，结合蓝 白斑法和PCR法筛选阳性克 的海水鱼类 【，。微卫星是由串联的 1—6bp的简单 隆，获得大量微卫星标记，并在大黄鱼 F。代家系中 序列重复排列(如：AC、CCA或者GATA、SSR)组成 l3]。 检测其中部分位点的分离情况，以确定其是否能应 微卫星标记因多态性高、含量丰富、共显性遗传及 用于构建遗传连锁图谱。 片段小等优点而成为非常有用的遗传标记，已广泛 1 材料与方法 用于群体遗传学研究、亲缘关系鉴定、及遗传连锁 图谱构建和QTL分析 中 [4--6]o近年来，国内外的研 1．1 实验材料 究者公开发表的大黄鱼微卫星引物有66对[7--11】，其 采用 2006年捕于福建省宁德市官井洋海区的 主要用于大黄鱼群体遗传结构和多样性分析、雌核 野生个体用于文库的构建。分离方式分析所用的F 发育鉴定、亲子鉴定等研究中6【]。由于缺乏足够的 代家系构建于2007年 3月，用来 自不同群体、遗传 微卫星标记，在大黄鱼第一代遗传连锁图上仅整合 差异较大的 4尾雄鱼和 4尾雌鱼为亲本混合繁殖， 11个微卫星标记 。目前获得的大黄鱼 SSR标记还远 构建了一个 4早×4混合繁育群体 。在亲鱼产卵前检 远满足不了构建微卫星遗传连锁图谱的要求。因此， 查其健康状况及性成熟度，并采用人工催产措施确 收稿 日期：2012-04—19；修订 日期：2012—08—22 基金