Leptin在鸭胃中的定位分布研讨.pdfVIP

i Lept n在鸭胃中的定位分布研究 刘华珍周斌罗冠中陈文钦彭克美‘ (华中农业大学动物科技一动物医学院武汉430070) 摘要：为了探讨leptin在禽类胃中的定位分布，本研究选用健康$1桃z-鸭5羽为试验动 物，全身麻醉灌流固定后，取腺胃和肌胃，制作石蜡连续切片，采用免疫组化链霉亲和素一 生物素一过氧化物酶复合物法(Stmptavidin-biofin-peroxidasv complexmethod，SABC)，研究7 leptin在肌冒和腺胃中的分布．结果显示：leptin在樱桃谷鸭腺胃粘膜上皮细胞、浅层单管腺 以及深屉复管腺的臆上皮细胞的胞质申分布，阳姓鞭拉呈檬黄色．在肌霉组织切片中，有少 量的阳性颗粒，主要分布在粘膜上皮和单管状腺臆窝上皮的游离端。研究结果表明：lcptin 在鸭肌胃和腺胃都有分布，为阐明lcptin在胃中的作用提供了形态学依据． 关键词：lcptin樱桃谷鸭辣胃肌胃SABC法 1994年底zhang等“1利用定位克隆技术克隆出TRE胖基因(obese gene，ob基因)，并 通过定性研究表明ob基因的蛋白产物leptin具有抑制摄食、降低体重的作用。以前的研 究认为leptin是由脂肪细胞分泌，释放入血液。与靶器官上的受体结合而发挥各种生理 功能。据现有研究leptin参与调节摄食、能量代谢、激素分泌、生长、生殖和免疫等功 在大鼠的胃窦和胃底部的粘膜细胞上探及了LeptinmP,NA的表达，表明leptin参与对胃功 能的调节。有关Leptin对禽类胃的作用研究报道较少，因此本研究以健康樱桃谷鸭为试 验动物，探讨Leptin在禽类胃中的定位分布，为深入研究Leptin对禽类胃功能的调节作 用提供形态学依据。 1材料与方法 1．1试验动物 健康樱桃谷鸭5羽(平均体重O．75±0．1kg)，购于武汉市畜牧研究所。 1．2取材及切片 将动物深度麻醉后。从膊骨正中线剪开胸腔，暴露心脏，从左心室进针，快速灌入 0．9％的生理盐水(含2％柠橡酸三钠)，同时剪开右心耳，直至流出清亮液体为止，然后 7．4)400ml。固定好后。迅 注入新鲜配制的4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定荆(4℃，pH 速取艨胃和肌胃，若发现组织固定欠佳。可在相同固定液中后固定2—3h(4℃)。待固定 nm)。 适度后，修整组织块，制作石蜡连续切片(横切，厚6 1．3SABC法染色 水。蒸馏水新鲜配制的3％H202室温反应lOmin，以灭活内源性过氧化物酶；热修复抗原后， 一24- 滴加正常山羊血清封闭液，室温20min；甩去多余液体，滴加适当稀释的一抗(1：100稀 染，脱水、透明、中性树胶封片。同时，设阴性对照，用PBs代替一抗。 2结果 2．1leptin在腺胃中的分布 光镜F观察，细胞质着色，呈棕黄色。阳性产物在粘膜上皮细胞中广泛分布，在单 管腺及复管腺腺细胞中也有少量分布。另外，在复管腺集合窦中有大量阳性颗粒。 2．2leptin在肌胃中的分布 光镜下观察，肌胃中也有少量阳性颗粒，主要分布在粘膜上皮和单管状腺隐窝上皮 的游离端，这些阳性颗粒呈卵圆形或多边形。 2．3阴性对照 阴性对照的结果为阴性。 3讨论 3．ileptin及其受体在胃中的表达 研究指出胃可合成、贮存leptin，并可将其释放入血液及胃肠内脏。1998年Bado等”1 分别应用免疫组化法、RT-PCR法检测发现鼠胃粘膜中具有leptinmRNA及其受体的表达， 并检测到leptin免疫反应细胞多集中在冒底腺的下1／2，类似于主细胞分泌胃蛋白腺原 的部位。Sobhani等”1对24例正常人胃组织研究发现，人胃粘膜内有leptinmRNA年【11eptin mRNA表达。 受体的表达。雷治海等“01对猪的研究