高压氧暴露对小鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白2mRNA表达的影响研究.pdfVIP

——一一 壹星墨墨曼翌尘墨堕塑墨垦堕塑堕壅生墨皇=!竺!坐墨垄塑丝堕 高压氧暴露对小鼠肺组织巨噬细胞炎症 蛋白--2mRNA表达的影响 海军医学研究所王世锋王文波朱嘉 摘要：目的：现察高压氧暴露后小鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白一2mRNA(macrophageinflammatory 照组吸入空气，高压常氧组吸入氮氧混合气，但氧分压与空气中氧分压相同．动物出舱后解剖取肺， 损伤也呈增加趋势。 关键词：高压氧，肺型氧中毒，巨噬细胞炎症蛋白一2mRNA 在长时间使用呼吸机和临床高压氧治疗不当时，容易发生肺型氧中毒。肺型氧中毒表现为肺部 出现充血、出血和炎细胞浸润，其中以多形核自细胞(polymorphonuclear 的PMN可以激活氧化酶，产生和释放大量的自由基。大量的PMN在肺脏中聚集、活化，势必对肺组 织产生损伤。导致肺脏淤血、出血，甚至肺泡壁破损，肺泡上皮脱落。 趋化性细胞因子是由8-10KDa小分子量蛋白质组成的细胞因子超家族。巨噬细胞炎症蛋白 一2啦I卜2)是CXC亚家族成员之一，可引起多形核自细胞的定向游走并激活。对炎症的发生起重要作 用…，关于MIP-2在肺型氧中毒肺损伤中的作用国内外少有报道。本研究观察了不同剂量高压氧暴 露后MIP-2mRNA表达的改变，探讨MIP一2在高压氧引起的肺损伤中的可能作用。 材料和方法 1主要试剂： 总RNA抽提试剂盒(TrlzolReagentSystem4)购自上海华舜生物工程有限公司，RT—PcR试 RNAPCRKitVer 剂盒(TaKaRa Sigma公司。高压氧气由海军医学研究所提供。 2实验动物与分组： 健康雄性小鼠40只，体重(22士5)g，由上海西普尔～必凯公司提供．自然光照，实验前禁食 (Normal 造成的肺氧中毒程度) 3动物模型制备： 为O．021MPa(与空气中的氧分压相同)。对照组在正常环境中自由呼吸空气。 4RT-PCR法检测肺组织中瑚【P。2基因的表达： 救捞专业委员会2∞5年学术交流会论文集 一—————————————————————————————————————_—’—————————^—————————’—_——————————————————————一 4．1出舱后处理： 动物出舱后-2％戊巴比妥钠腹腔注射．在无RNA酶环境中开胸，取肺组织分别浸入液氮中保 存。 4．2总RNA抽提及定量： 取出冷冻保存的肺组织置于一次性试管中，加入lmlReagent液，用高速匀浆机打碎组织 lh，4C离心，120COg， 4．3RT—PER过程吐 RNAPCR 4．3．1取RNA模板1耀，采用TaKaRa Ver2．1试剂盒中的反转录引物Oligo (dT)一Adaptor，合成cDNA第一链。 4．3．2 F游引物：5-AAC御隗AcAAcATcTGGGCAAT-3’，所有引物均由上海生工生物工程有限公司合 成。 产物均加入200ng。 4．3．4将上述反应管置于PCR仪中，按下列程序进行扩增： imin链延伸 60s变性一59℃90s退火一72℃ 13-aain扩增参数：95℃预变性2功in，然后按95(2 12min； 的程序反应28个循环，最后的延伸为72C 60s变性,55C90s退火一72Cimin链延伸 blip．2扩增参数：95∑预变性2rain，然后按95C 12mira 的程序反应30个循环，最后的延伸为72(2 4．3．5RT-PCR扩增产物的鉴定与定量分析： 取per扩增产物10山在1．5％的琼脂糖凝胶中进行电泳检测。