马尾松的微繁殖及其离体菌根形成研究.pdfVIP

生物技术 马尾松的微繁殖及其离体菌根形成 朱丽华瞿红叶昊小芹 南京林业大学森林资源与环境学院，北京，210037 关键词 森林保护学；马ajr套；微繁殖；菌根 松树是北半球最重要的森林树种，由于其生命周期长，采用常规的有性繁殖方法进行树种改良往往要 花费很长的时间，因而其组织培养技术备受重视，并且已成为许多发达国家和发展中国家生物技术领域的 研究热点。据初步统计，到目前为止，各国学者已对松属的60多个种、变种或杂种分别进行了组织培养， 其中近40个经器官发生或体细胞胚胎发生获得再生植株【1】。 自然界中，松树是典型的外生菌根型树种。许多研究证明，菌根具有促进植物对营养、水分的吸收从 而促进宿主生长，减轻由营养、水分、通气、土壤结构及病原物等引起的压力从而提高移栽成活率等诸多 功能。由于组培繁育整个过程均在无菌条件下进行，组培苗生长状况往往较差、抵抗力较弱、移栽成活率 等利用欧洲赤松(Pinus 与未接菌材料相比，菌根在促进再生植株的生长及改善其对移栽环境的适应性、提高移栽成活率等方面的 有益作用非常明显p引。 细胞胚胎发生【6】途径获得组培再生植株，其无菌条件下的菌根合成亦有报道【4一’8】。本试验以无菌幼苗为外 植体研究了马尾松植株再生所需的条件并在瓶内实现了菌根化。 1材料和方法 1．1供试马尾松种子、外生菌根真菌及其处理 试验用马尾松种子为自由授粉的成熟种子。使用前经4℃低温处理，参照朱丽华等关于湿地松组织培 mnl处 养及植株再生【10】的方法将其培养成无菌苗。将萌发生长了21．28天的无菌苗从子叶着生部位下5—8 将根切除，子叶连同5—8mm长的胚轴(子叶，胚轴)作为外植体备用。 tinctorius)。 供试菌根真菌为在PDA培养基上纯培养3周的彩色豆马勃(Pisolithus 1．2马尾松丛生芽诱导、伸长、生根及再生植株菌根的形成 将外植体接种到附加0，l，2，4 6-BA与O．2NAA的GD培养基上，4周后观察外植体生 mg／L mg／L 长状况及丛生芽分化情况，计算诱导率(有芽外植体数／接种外植体数)及每外植体平均形成芽数；然后将 NAA的DCR培养基上以促进丛生 外植体连同已分化丛生芽转移至添加0．59／L活性炭(AC)或0．2mg／L 芽的伸长；待丛生芽长至1．0一1．5cm，将其切割成单个，接种至添加不同浓度NAA和IBA的培养基上诱 导不定根，3．4周后转移至无激素但添加O．5 g／LAC的I／2SH培养基中促进不定根表达：或当不定根长至 2-4 cmX0．5cm菌块4块(对照为不接菌)， llLrfl，将其转至添加I／4SH液体培养基的珍珠岩中，并接入0．5 分别于2个月、4个月后观察植株生长及菌根形成情况。 以上培养基除生根培养基中蔗糖浓度为20 mg／L外，其余均添加蔗糖30mg／L、水解酪蛋白(CH)500mg几、 光照强度2000Lux，每日光照16h。 中国科协第四届优秀博士生学术年会论文集 1．3菌根解剖结构观察 再生植株与彩色豆马勃共培养4个月后，将根系取出，选取二叉分枝状短根，固定于50％FAA液中，同 时取未接菌再生植株的不定根为对照，采用常规石蜡切片法制片，切片厚度8pm，番红．固绿对染，中性 树胶封固，Olympus显微镜观察并拍照。 2结果与分析 2．1马尾松丛生芽的诱导 将外植体接种到附加不同浓度6-BA与0．2 mg／LNAA的GD培养基上，4周后统计结果(表1)表明， 6-BA对马尾松丛生芽诱导有显著的影响。在未添加6-B