马立克氏病病毒类白细胞介素8vIL8的生物趋化作用研究.pdfVIP

382 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 马立克氏病病毒类白细胞介素8(vlL一8)的生物趋化作用 高巍秦爱建‘张鑫宇金文杰邵红霞 (扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室，江苏扬州225009) 摘要：马立克氏病病毒(MDV)是鸡的一种传染性致肿瘤病毒，涉及的致瘤机制十分复杂。MDV编码 一种病毒源性趋化固子vIL-8，其在致病致癌中酶作用尚不完垒明了。本研究利用杆状病毒表达系统，将vll一8 基因克隆入转移载体pFastBacl，然后转化到DHl0Bac感受态细胞中与Baemid杆状病毒穿棱载体进行转座重 组。通过重组于转染Sf9细胞得到含vIL8的重组病毒rBacvlL一8，将其感染昆虫细胞表达vIL-8；利用重组表达 产物vIL一8对雏鸡T、B淋巴细胞进行生物趋化分析。结果显示：重组vIL-8在一定浓度范围内，可使T、B细胞 发生趋化作用，最高趋化指数分别为3．31±0．50和402士0．48，呈典型剂量依赖的钟形趋化性反应曲线；分析 发现vlL-8对B细胞趋化活性较T细胞强(0．01(P0．05)，提示vIL．8对靶细胞的趋化性与病毒感染过程相关， 在早期溶B细胞感染中有重要作用。 关键词：马立克氏病病毒；vIL．-8；杆状病毒；趋化活性 Disease 马立克氏病(Marek’sDisease，MD)是由疱疹病毒科的马立克氏病病毒(Marek’sVirus， MDV)引起的一种病毒性肿瘤病，致癌毒株主要是MDV-1(血清1型)，可引起鸡各种内脏和组织中 以T淋巴细胞肿瘤为特征的增生性疾病，其致病致瘤机制至今未完全明确…。最近研究发现MDV-1 等CXC趋化因子同源性较高的病毒因子8】【”。正如其他疱疹病毒表达的趋化因子，vlL-8很可能在病 毒感染和戚对宿主免疫调节中起重要作用”j。 在体外，用杆状病毒表达的vlL-8对鸡的外周血单个核细胞(PBMC)有趋化性91。通过构建缺失 vlL．8基因的MDV毒株，证实其虽然对病毒复制非必需，但它是早期溶细胞感染中的重要毒力因子， 以致对病毒的二次溶细胞感染和肿瘤发生产生深远影响”】。由于MDV攻击的主要靶细胞为T、B细胞， 其病毒趋性是否与vlL．8的趋化性相关?本研究试图通过用杆状病毒系统对MDV的vlL一8基因序列进 行表达，利用重组蛋白研究vlL．8对T、B细胞的趋化活性作用，进一步揭示vlL-8在病毒感染过程中 的可能机制和其在MDv致肿瘤中的作用。 1材料与方法 1．1菌株、载体、病毒、细胞、实验动物 大肠杆菌DH5ot由本室保存；转座用大肠杆菌宿主菌DHIO Bac购自Invi竹ogen公司。真核表达 细胞sfg(spodoptera BRL)口1周龄SPF雏鸡购自南京药械厂。 1．2分子生物学试剂和抗体 基金项目：国家自然科学基金和高等学校伞国优秀博士学位论文作者争项基金项目(200256)资助。 作者简介：高巍(1979一)，女，江苏宜兴人，博七研究生．主要研究方向是动物分子病毒学和免疫学。 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 383 CD8一RPE，Bu．1-FITC标记单抗购自SouthernBiotech公司。 1，3重组Bacmid的获得 用EcoR 通用上游引物和vlL一8编码基因下游引物进行PCR鉴定，阳性质粒命名为Bacmid—vlL．8。 1．4重组杆状病毒的获得及PCR鉴定 编码基因下游引物进行P1代重组病毒基因组PCR鉴定，模板为重组病毒感染细胞上清。经2代增殖， 获得高滴度的重组病毒rBacvlL一8。 1．fi雏鸡T、B淋巴细胞的分离 根据文献方法4””，无菌取1周龄sPF雏鸡的胸腺，法氏囊，用金属滤网过滤制成单细胞悬液，经淋 巴细胞分层液分离，尼龙毛棉柱法再次纯化后获得雏鸡T、B淋巴细胞。细胞悬液调整至浓度为1× (FACSAria，美国BD公司)分析。 1．6趋化试验 将重组杆状病毒感染细胞3天后收获Sf9细胞，经冻融、超声裂解、浓缩，，获得细胞裂解上清， 与蛋白对照组中趋化细胞数的比值即