马立克氏病病毒人工感染鸡细胞凋亡病变及凋亡机制研讨.pdfVIP

马立克氏病病毒人工感染鸡细胞凋亡病变及凋亡机制研究8 祁保民1，姚金水1，陈文列2，卢惠明1 摘要：通过光镜、电镜观察以及免疫纽织化学方法对马立克氏病病毒人工感染鸡的多种纽织的 实质细胞进行了细胞凋亡病变及凋亡机制研究。结果表明，马立克氏病病鸡肝、肾、心、脾、腺胃、 卵巢、羽髓等组织、器官的实质细胞均出现明显的细胞凋亡病变。光镜观察，可见肝细胞、肾小管 上皮细胞、腺胃腺上皮细胞、m肌纤维、脾脏内的淋巴细胞、卵巢内的颗粒膜细胞、羽髓细胞的细 胞核裂解成大小不等的、致密浓染的球形团块。电镜观察，可见这些细胞的细胞核染色质经历凝集、 边集、裂解，最后形成许多凋亡小体等不同阶段。免疫组化研究结果显示，上述细胞均有明显的FasL 表达，FasL的表达表明细胞凋亡信号增强，细胞凋亡发生。 关键词：马立克氏病， 凋亡， 病变， 机制， 鸡 鸡马立克氏病(Marek’Sdisease，MD)是由血清学I型马立克氏病毒病毒引起的淋巴细胞性肿瘤 性疾病。病鸡的性腺、肝脏、肾脏、脾脏、心脏等明显肿大，表面、切亟常可见灰白色、光滑的肿 瘤结节，外周神经增粗，腺胃肿大、胃壁增厚等。病理组织学研究表明，在外周神经、性腺、虹膜， 各种内脏器官、皮肤等组织中，淋巴性肿瘤细胞呈局灶性或弥漫性增生、浸润，增生的肿瘤细胞成 分为小淋巴细胞、中淋巴细胞、成淋巴细胞、网状细胞等多形态的细胞。在对MD病变研究中，对 组织器官的实质细胞所发生的病交研究较少，未见有报道。本实验通过光镜和电镜观察对MD疾病 过程中的实质细胞病变进行了研究。 马立克氏病的发病机理中，许多机理人们至今仍不清楚。如：对于马立克氏病病毒引起的动脉 粥样硬化的发病机理、MDV的致病机理和疫苗免疫的保护机理等尚缺乏全面深入了解。 肿瘤的发生是原癌基因的激活与抑癌基因的失活共同作用的结果，而原癌基因、抑癌基因又是 结果表明MD肿瘤组织中bcl．2表达显著高于相应的正常组织，认为bcl．2表达产物通过阻遏细胞凋 亡，从而促进了MD淋巴瘤的形成。目前，对于淋巴细胞的转化、增生及浸润研究较多，而对器官 的实质细胞在肿瘤形成过程中所发生的变化研究不多。Fas抗原和bcl．2分子是对细胞凋亡有密切关 系的两种分子，bcl．2是促进细胞存活的基因，具有抑制细胞凋亡的功能。Fas基因和FasL基因是促 合后，可以在数小时内诱发Fas表达细胞发生凋亡。Fas或FasL在病鸡器官实质细胞或肿瘤细胞中 的表达如何，本实验对多种实质细胞的FasL表达情况进行了研究，以探索MD的发病机理。 作者简介：祁保民(1964～)，男，汉族，河南虞城人，副教授，硕士，主要从事动物病理学研究。 2004学术年会 35 1材料与方法 1．1材料 1．1．1鸡从福清市某鸡场购买60只，品种：海兰。 1．1．2种毒MDV一京一1株血毒，由北京市农林科学院畜牧兽医研究所提供。批号：9801，在液氮中 运输和保存。 1．1．3兔抗FasL抗体：购自美国SantaCruz—Biotechnology公司 1．2方法 1．2．1实验鸡分组、攻毒、饲养：实验分攻毒组与正常对照组。每组各30只，隔离饲养。8日龄攻 毒。将血毒进行100倍稀释，每只雏鸡腹腔注射0．5ml。实验鸡饲养至100日龄。 1．2．2取材 实验期间每天及时剖检病死鸡，并采集眼观具有典型MD病变鸡肝、肾、心、脾、卵巢、腺胃 等组织进行如下固定： (1)固定于体积分数为10％的福尔马林溶液中。 (2)固定于体积分数为3％的戊二醛和1．5％的多聚甲醛混合固定液内。 1．2．3光镜制样、观察 石蜡切片，H．E染色，光镜观察。 1．2．4电镜制样、观察 1％锇酸后固定，环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色，JEMl010型透射电镜 观察。 1．2．5免疫组化染色 采用二步法：石蜡切片脱蜡至水一高温抗原修复一3％过氧化氢甲醇溶液灭活内源性过氧化物酶 羊抗兔二抗一PBs冲洗--DAB显色一苏木素复染，中性树胶封固。 2结果 2．1光镜观察 肝脏、肾脏、心脏、卵巢的间质中均可见大量的淋巴样肿瘤细胞的浸润，在严重浸润的肝脏、 肾腺、腺胃、卵巢、心脏、脾脏内可见肝细胞、肾小管上皮细胞、腺胃深层复管状腺腺上皮细胞、 心肌纤维、脾脏淋巴细胞、卵巢的颗粒膜细胞及间质细胞、羽髓间质细胞出现了明显的细胞凋亡。 凋亡的细胞染色质凝集，嗜碱性增强，细胞核碎裂成数个