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Figure
4RT-PCR of inMeth-Afibrosarcoma．TotalRNA
Figure B5-integfin
analysisCAR，‰一integrin，133一integrin，and
cells thenRT-PCRwas as
was fromMelh-Afibrosarcomaand describedinTable1．
prepared performed
M，、BK。受体激活后引发爪蟾卯母细胞内钙释放特征的研究
刘伯一1贾占峰1贾庆忠1耿仙1王娜1张海林1
河北医科大学药理学教研室河北石家庄050017
以爪蟾卵母细胞为
摘要目的：研究爪蟾卵母细胞外源件表达的M．R及BK：R激沂后，引发ffll胞内钙变化的特征。方法
表达系统，外滁性表达M1及BK2受体．采用取电极电压钳及激光JL聚焦址微镜方法，观察受体激活后卵母细胞内钙变化。
结粜
发的氯电流均可被内顾刚钝库钠杂抑制刺thapsigargin取消。MI、BK2受体撒活后均引起卵母细胞内出现钙波。结论Ml
受体、BK，受体激沂后可引麓细胞内钙释放，升高的钙离子绝大邮分来自卵母细胞内赝叫钙库的钙释放。释放的钙离子以钙
波形式往细胞范剧内扫。散。
可抑制大鼠颈上交感神经节上(SCG)的M电流。介导M电流的离子通道称为M通道，其分子基础己被
有利于使去极化的膜电位回到静息电位，从而恢复细胞的兴奋性2。M1、BK2受体的激动剂可通调节M
电流的大小，影响神经系统的兴奋性。此外M电流还受到其他多种神经递质与激素的调节，包括组胺、血
管紧张素、LRH等’’，而上述物质对M电流调节作用都是通过激活相应Gq蛋白偶联受体来实现的。在
22l
对M电流调控机制的研究中发现，受体激活后引发的通路下游内钙释放发挥了重要作用，例如在大鼠SCG
因此本文以卵母细胞为载体，研究M，、BK2受体激活后引发爪蟾卵母细胞内钙释放特征，探讨受体激活
后的下游信号在引发内钙释放环节上的机制。
l材料与方法
1．1材料
1．1．2 主要仪器 500B放大器；Digidata
Geneclamp
TCS．SP2激光器；LeicaDM．IRBE倒置荧光显微镜(德国Leica公司)。
1．2方法
1．2．1爪蜡卵母细胞制备及分子生物学实验于冰冻麻醉状态下从雌性非洲爪蟾下腹部取出卵母细胞，
scaleRNAProduction andT7试剂盒将线性化后的质粒体外
切线性化。采用Riboma)【1”Large Systems．SP6
转录，纯化产物cRNA，电泳定量。
1．2．2受体在卵母细胞的表达及双电极电压钳(TEVC)记录 MIR或BK2R
利用显微注射法，将1-2ng
行全细胞TEVC记录。记录钳制电压为0时，+60mV处全细胞电流。
1．2．3卵母细胞内钙荧光标记及激光共聚焦显徽镜(LSCM)观察采用微注射法，将钙离子荧光探针
终浓度达到12．南M。将荧光标记后的卵母细胞移至共聚焦显微镜载物台。氩离子激光器，10倍物镜，488nm
激发，榆测波长532nm，采用XY-t模式对卵母细胞扫描，采样率8s／帧，连续扫描40次。
1 2．4卵母细胞钙波分析及数据处理
在卵母细胞的扫描平面选取六个感兴趣区域(ROD来观察其所包含范围内钙荧光强度的变化。钙荧光强
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