植物制片技术.ppt

植物显微技术 绪 论 一、什么是植物显微技术 用于观察研究植物内部精细结构的技术方法，包括制片技术、光学显微镜技术和显微摄影技术，是一门建立在生物学、化学以及物理等多门学科基础之上的综合性技术性学科。 绪 论 二、植物显微技术的任务和目的 根据材料的自然特性，观察和研究的需要，将材料制成适宜的薄片，选择合适的显微镜，显示材料正确而清晰的结构，获得反映材料真实特征的显微照片。 绪 论 三、植物显微技术发展简史 植物显微技术的诞生与早期发展，最早可追溯到列文?虎克的显微镜与发现。方法非常简陋，材料未经任何处理直接在显微镜下观察，显微镜的分辨率也比较低。 绪 论 ? 植物显微技术的日渐成熟 固定法出现 石蜡切片法的发明 染色方法的使用 早期显微图谱多为徒手绘制 高分辨的显微镜制造使用 照相技术的应用 绪 论 ? 植物显微技术的近代发展 多种功能显微镜的使用 电镜技术的发明 多种切片技术的运用 电镜技术 绪 论 植物显微技术的发展热点 免疫化学与显微技术的结合 分子生物学向显微技术的渗透 植物显微技术 植物制片技术 第一章 概论 第二章 植物制片的步骤原理 第三章 植物制片的各类方法 第四章 植物组织化学的测定 概 论 目的： 为观察植物内部细微结构，将植物材料制成适合显微镜观察的薄片。 概 论 制片分类： 保存时间分：临时制片、永久制片 制作方法分： 活体观察 切片法 非切片法 概 论 活体观察： 对材料不加任何处理直接观察，达到镜检目的。 概 论 切片法： 用刀具将材料切成薄片，进行镜检。 有徒手切片，石蜡切片，塑料切片等。 概 论 非切片法： 不同于上述两种制片方法，用化学药剂处理材料后进行观察。 有离析法、涂抹法、整体封固法、透明法等。 第二章植物制片技术原理步骤 植物制片技术原理步骤 制片的步骤： 选材?固定?清洗?脱水?透明?浸蜡包埋?切片?粘片?脱蜡?染色?脱水?封固。 先后顺序不可颠倒，环环相扣。 一、选 材 根据研究和观察的目的确定取材的部位。 原则是“准、巧、小”。 一、选 材 植物材料的切取： 根、茎类轴性器官的切取： 1、横切面：观察各种组织的横切面，及其所占比例。垂直于长轴方向切取。 2、纵切面：观察各种组织的纵切面，平行于长轴方向切取。 分为：径向切面和切向切面。 一、选 材 叶的切取：横切面。 第二章植物制片技术原理步骤 二、杀死、固定、保存 杀死：迅速终结植物材料的生命。要求越快越好，使用渗透力强的药剂。 固定：在杀死基础上，组织或细胞保持生活的状态，并在以后制片的过程中不发生变化。 保存：组织或细胞保持生活的状态，能保存较长时间不发生任何变化。 二、杀死、固定、保存 固定的原理 化学作用：凝结作用。如蛋白质变性。 物理作用：沉淀作用，如油类、脂肪遇锇酸发生黑色沉淀。 二、杀死、固定、保存 理想固定剂具备的特点 1、快速渗入材料，杀死原生质，固定其细微结构；不因固定等人为因素发生变化。 2、增加细胞结构及内含物的折光程度，使之更为清晰，适合显微镜观察。 二、杀死、固定、保存 理想固定剂具备的特点 3、组织或细胞不发生收缩或膨胀 4、能增加染色或媒染能力。 5、增加组织的硬度易于切片，但不至于过于松脆。 6、具有保存作用。 二、杀死、固定、保存 常用固定剂 1、酒精：分子式为C2H5OH，是常用的有机溶剂，能与水以任意比互溶。是良好的固定剂，杀死速度极快。缺点：具收缩作用。 2、甲醛：分子式为HCOH，是气体。作为固定剂时，为溶于水的溶液（38%）来使用。有良好的硬化作用，也有收缩固定过度，渗透慢的缺点。 二、杀死、固定、保存 常用固定剂 3、冰醋酸：分子式为CH3COOH，是具有强烈刺激性气味的无色液体。 特点是渗透力强，可防腐，保存蛋白质和染色体，但溶解脂肪，有膨胀作用。 4、铬酸：分子式为H2CrO4，是CrO3的水化物，为红棕色晶体，强氧化剂。 可沉淀蛋白、核酸。有收缩、渗透慢、硬化的缺点。 二、杀死、固定、保存 常用固定剂 5、苦味酸：淡黄色晶体，分子式为C6H2（NO2）3OH，强烈的爆炸物，以过饱和水溶液保存。具有渗透力强，沉淀蛋白、核酸，防硬化，增染色的特性，是优良的固定剂。 6、锇酸：分子式为OsO4，是灰黄色的晶体。最好的固定剂，脂类的唯一固定