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第二十章  免疫检验自动化仪器分析; 免疫检验自动化 （automation of immunoassays) 是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化进行。;第一节 自动化免疫浊度分析系统;　一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶液时，被其中的免疫复合物微粒吸收、反射和折射而减弱，在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗体的量呈函数关系。与已知浓度的抗原标准品比较，可确定标本中抗原含量。;; 1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。;用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a为单个胶乳颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透射光减弱或散射光增强。 ;（二）方法评价　; 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素密切相关，其公式如下：; 式I θ中为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；c为浓度；N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；θ为散射光与入射光的夹角（散射夹角）。;;定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段，溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号在开始反应7.5s～2min内的第一次读数，专门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到最低。 ;定时散射比浊法测定原理示意图 ;1. 仪器测定技术要点 ;　2. 抗原过量检测 ;BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪;　速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅1～2min即可完成。 ;仪器测定技术要点 ;　抗原抗体复合物形成的速率　　;抗原抗体反应速率的动态变化;;;;IMMAGE全自动特定蛋白分析仪;(三)方法评价;　1.抗原抗体比例 　2.抗体的质量 　3.增浊剂的使用 ; 4.伪浊度 5.入射光光源和波长 6.结果报告中的计量单位 7.标准曲线制备与质量控制 ;　（二）临床应用;第二节自动化学发光免疫分析系统;　吖啶酯标记的化学发光免疫分析仪是一种用发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫分析法。该仪器利用化学发光技术和磁性微粒子分离技术，以吖啶酯为化学发光剂，以细小的顺磁性微粒为固相载体。其测定原理与双抗体夹心法、双抗原夹心法和竞争结合法等相同。 ;;Y;发光;仪器测定技术要点 ; 吖啶酯标记化学发光免疫测定示意图 ;ACS：180 SE和ACS∶CENTAUR化学发光免疫分析仪;ci8200; 酶联发光免疫分析仪是用参与催化某一化学发光或荧光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应后，加入底物(发光剂)，由酶催化和分解底物发光，通过光信号的强弱来进行被测物的定量。 常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶(ALP)，常用的发光底物有鲁米诺、AMPPD和4-MUP等。 ;　该仪器采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗原或抗体、以塑料锥形小管为固相载体，鲁米诺为化学发光剂，还利用增强剂使化学发光强度增加、时间延长。;鲁米诺是一种还原剂，在碱性溶液中被H2O2氧化产生鲁米诺衍生物（激发态）。它以光量子辐射形式返回基态时，发出微绿色可见光。 ;鲁米诺增强化学发光的原理;辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫测定示意图 ;Vitros ECi全自动增强化学发光酶免分析仪;;AMPPD发光反应原理示意图 ;抗原抗体结合 洗涤、分离 加入AMPPD发光剂 信号检测 ;碱性磷酸酶标记的化学发光免疫测定示意图 ;Access全自动酶标记化学发光免疫分析仪;UniCel?DxI 800;IMMULITE 2000型全自动酶标记化学发光免疫分析系统;（三）碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫分析仪 ;4-甲基伞型酮磷酸盐（4-MUP）反应原理示意图 ;仪器测定技术要点 ;碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫测定示意图;AXSYM全自动酶标记荧光免疫分析仪;AIA-1800型全自动酶标记