产肠毒素性大肠杆菌对Hela细胞黏附及损伤机制的研讨.pdfVIP

宁夏大学 硕士学位论文 产肠毒素性大肠杆菌对Hela细胞黏附及损伤机制的研究 姓名：沈梅 申请学位级别：硕士 专业：生物化学与分子生物学 指导教师：王玉炯; 邓光存 2011-03 摘 要 产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC ）是导致人和幼畜发生腹泻的重 要病原菌。人和幼畜感染 ETEC 后，常因剧烈水样腹泻和迅速脱水而死亡，发病率和死亡率均很 高，给畜牧养殖业造成巨大的损失，同时也给人类公共卫生安全带来严重威胁。ETEC 的致病过 程分两步：粘附素的定植过程和肠毒素的致病过程。目前，关于产肠毒素性大肠杆菌和宿主肠道 粘膜上皮细胞相互作用的研究是本领域的热点。因此，本研究分别选取 C83529 （O141.K99 ）菌 株（携带 K99 黏附素）、K99-F41 菌株（携带 K99 与 F41 黏附素）和 C83922 强毒株（携带 K99 、 F41 黏附素和 ST 肠毒素），通过建立上述三种 ETEC C83529 、K99-F41 和 C83922 菌株与 Hela 细胞相互作用的细胞模型，分别从不同菌株对 Hela 细胞的黏附作用、不同菌株作用后 Hela 细胞 的炎性反应以及氧化与抗氧化能力变化等方面研究了病原菌黏附 Hela 细胞及其损伤的机制，为 进一步揭示 ETEC 的致病机制提供理论依据。主要实验结果如下： 1.本研究中，建立产肠毒素性大肠杆菌黏附 Hela 细胞模型的最佳条件为，细菌数量为 1.2× 5CFU，共孵育时间为4h 。 10 2.利用实时荧光定量 PCR 方法对不同菌株与 Hela 细胞相互作用后 IL-6 、NF-κB 、TNF-α 和 ICAM 等炎性细胞因子 mRNA 水平变化的研究表明，三种菌株均能使 Hela 细胞发生炎性反应， 尤其以 C83922 菌株最为显著。 3.通过对产肠毒素大肠杆菌作用 Hela 细胞后，细胞内活性氧自由基含量和抗氧化物质含量影 响的研究表明，Hela 细胞内氧化和抗氧化能力发生了显著变化，提示氧化与抗氧化系统失衡可能 是产肠毒素性大肠杆菌造成 Hela 细胞损伤的机制之一。 关键词：产肠毒素性大肠杆菌，Hela 细胞，炎性反应，氧化作用，抗氧化作用 I Abstract Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is one of the most important pathogenic bacteria in human and animals. Human and neonatal animals often die from diarrhea and dehydration after they mere with infected ETEC. The diarrhea is responsible for economic losses due to mortality, morbidity, decreased growth rate, and posese serious threat to the public health.The pathogenicity of ETEC includes two step: adhesion colonization and enterotoxin pathopoiesia. Currently, research on the interaction of ETEC and intestinal epithelial c