M细胞实验中电极所处位置的判断方法研究.pdfVIP

第27分会场整合生理学——从分子到整体 503 M细胞实验中电极所处位置的判断方法 虞 桑 童学红 张茂先 李效义 首都医科大学生理学教研室，北京，100054 摘 要 硬骨鱼类Mauthner(M)细胞作为一种优秀的实验模型，长期以来被用于中枢神 经系统的研究。在实验中需要刺激鲫鱼脊髓，逆向激活M细胞轴突，用玻璃微电极记录其细 胞内、外的电变化。为了鉴剐电反应是否来自M细胞，本实验室结合多年实验经验总结了不 同细胞的电反应特征，以正确判断记录电极在实验动物体内所处的位置。 关键词 M细胞 脊髓EPSP逆向动作电位超极化电位(PHP) 在开展Mauthner(M)细胞神经网络的电生理研究中，记录电极的准确定位，是正确记录M细胞电 反应的前提。但因实验中使用的脑定位仪具有其特殊性，不能对M细胞作精确定位，需要实验人员凭 借经验辨认不同波形，用以修正其记录电极的位置。 依据脊髓诱发反应的特征估计电极所处位置：在探测负电中心的过程中，由于刺激脊髓常常会引起 一些与M细胞逆向反应相似，但并非来自M细胞的电反应，应予仔细区分。 一、典型的M细胞逆向动作电位 见图1。在负电中心记录的胞外逆向动作电位潜伏期为0．4～0．7ms，是幅度为20～40mV的负向 锋形电位，时程约0．8ms，间隔较长(0．5～ls)的重复刺激引起的动作电位之后还出现几个尖锋状的正 相电位波动，即EHP(extrinsic hyperpolarizing potential)。 图1 在轴突帽记录的M细胞胞外动作电位 在胞体做胞内记录时，逆向动作电位如图2A1所示，幅度可达40mV，降支近基线处常有小的错折， 近外侧树突远端，前电位和脊髓EPSP愈小，如图3。 ‘ 504 以科学发展观促进科技创新(下) ：==————————————————#——————————————————————————————一 ●l 净目oN ，●●●●●●J●●●●●J ：、 一 一 址 A B 图2在M细胞胞体(A)和腹侧树突 图3在M细胞胞体(实线)和外侧树突 (B，距胞体362肚m)记录的逆向动作电位 (虚线，距胞体412t-m)ig录的逆向动作电位 在探测负电中心的过程中，电极尽量不要刺入M细胞，以免造成膜的损伤，若偶然刺入胞内，则可 根据上述胞内反应的特点估计电极所处的位置，如脊髓EPSP幅度较高而刺入胞内之前所见的负电幅 度较低，电极刺入较深时，电极位置可能是在腹侧树突上，则记录电极应向尾侧移动。鱼体如处于左侧 斜位，电极还要向本侧M细胞的外侧移动才能趋近负电中心；若刺入胞内时脊髓EPSP很小，在胞外所 见的负电也很低，电极刺入点可能在外侧树突，故应把电极移向头侧和细胞内侧。 二、负向分级性反应 如图4。由于其潜伏期和波形都与低幅度的M细胞逆向反应相似，在探测初期，很容易误认为是 M细胞反应。该反应潜伏期约0．7～1ms，负向波较宽，在垂直和水平面上的空间分布范围很广，有时甚 至在脑表面都能记录到