产甘油假丝酵母细胞回用对甘油生产的影响研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四斑全国发酵工程学术讨论畚话主集 产甘油假丝酵母细胞回用对甘油生产的影响 谢涛“2，方慧荚1，诸葛健1 (1．扛南大学工生生物技术教育部重点宴验室，无锯214036) (2．胡南工程学院化学化工系．拥潭411104) 摘要：研究了产甘油假丝酵母细胞回用生产甘油的反复舟批发酵．实验结果表明；第一敷 发酵培养基KH：Po|浓度为0．4g·L一，回用培募基的曩适KH：P0‘浓度为0．1 g·L～，当 上一批次发酵液中葡萄糖浓度降至10g-L叫以下时，酵母细胞不经洗涤即可回用I经过15 个批次的反复分批发酵过程．甘油的平均产量、平均得率和平均生产能力分别达到138．69譬 ·L～、60．17％和2．31g·L叫·h一。分别比第一毂受酵结果增加了15．74％、15．48％和 39．16％，但回用至第15次时，菌体出现严重衰退，因此回用周期以12—14次为宜． 关键词：产甘油假丝酵母#细胞回用，甘油}反复分批发酵 引 言 甘油是一种重要的轻化工原料，广泛应用于化妆品、牙膏、烟草、香精、水性油墨、印 染纺织、涂料、合成树脂、皮革、造纸、制药、食品和国防等各个领域的1700多种产品Ⅲ。 在我国，由于受合成洗涤剂的冲击，肥皂行业日渐萎缩，甘油产量大幅下降。因此，利用 耐高渗酵母发酵生产甘油的产业化前景看好[“n。耐高渗透压酵母Candida glycerino— genes发酵生产甘油具有高产量、高得率和高回收率等优点，在我国得到．，较好的工业化 应用o．|]。但是，耐高渗透压酵母生产甘油的方法主要集中在传统的分批发酵法。为了 提高甘油的生产能力，降低生产成本，国内外一些研究者对反复分批发酵工艺口]、连续发 酵工艺“1和固定化发酵工艺【“”生产甘油进行了深入研究，但结果都并不十分理想。 的影响时发现，当在富磷培养基中培养一定时间后再离心收集菌体转接入新鲜的贫磷培 养基中继续发酵，结果胞外甘油和胞内甘油的浓度均显著增加，而且发酵时间有所缩短。 因此，本文提出了酵母细胞回用的反复分批发酵策略，并对其回用时机的选择、回用培养 基中磷浓度的确定、回用细胞的处理方式及其多次回用的反复分批发酵过程进行了详细 研究。 1材料和方法 1．1菌株和培养基 菌株：Candidaglycerinogenes由江南大学发酵甘油研究设计中心提供。 作者简介：谢涛(1970一)，男，讲师，博士研究生． 第四次全国发酵工程学术讨论台 种子培养基(g·L_1)：葡萄糖100，尿素2，玉米浆8；自然pH值。’ O 记作(--P)、(士P)和(+P)，对应的KH2P04浓度分别为0．1、0．4和1．6g·L～。 0．1，NiCl0． 微量元素溶液(g·L“)；K10．2，ZnSQ·7H200．9，Na2S0．3，Sn．C12 05，NaBr0．05，MnSO‘·H202．5，CuSO‘·5H200．15，Co(NOa)2·6H200．01，Na鱼 O，·10H200．6，(NH‘)6MozO“·9H200．02．A12(S04)30．1，FeSO,·7H。O5．56，Na2 ·EDTA·2H207．46。 1．2发酵方法 种子培养：从刚转接培养好的新鲜斜面上挑取一环菌株，接人500mL摇瓶中(种子 培养基装液量为50mL)。于往复式摇床上32℃振荡培养19h(振幅i0cm，振动频率110 次·min-1)。 mL 分批发酵：按5％(v／v)的接种量将种子液接人装有60mL(士P)培养基的500 摇瓶中进行第一级发酵，发酵条件同种子培养。