N乙酰鸟氨酸脱酰基酶基因的克隆与原核表达研究.pdfVIP

下载本文档

0
0
约7.85万字
约 65页
2018-01-07 发布于未知
举报
版权申诉

N乙酰鸟氨酸脱酰基酶基因的克隆与原核表达研究.pdf

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

Cloneand of prokaryoticexpress N-acetylornithine Deacetylasegene DissertationSubmitted to Nanjing of UniversityTechnology in fulfillmentof partial requirement forthe of degree Masterof Engineering By DaweiZhu Wei Supervisors：Prof．Ping HuanLi 2008 May 1 111111111111111 1111111111111LUllll 0lIillll 摘要 Ⅳ_乙酰鸟氨酸脱酰基酶(N-acety’lomithine EC3．5．1．16)，具有广泛的底物特异性，可选择性地作用于L．型酰基化氨基酸，可应用于脂肪族氨基酸拆分，在氨基酸生产中具有重要的地位。除此之外， NAOase还可作为靶标用于研究新型抗生素。本文主要研究了Ⅳ．乙酰鸟氨酸脱酰基酶基因的克隆与原核表达。本文首先通过设计E．coli K12中的Ⅳ．乙酰鸟氨酸脱酰基酶基因．argE两端的引物，成功获取了E．coil K12的argE全基因。经基因序列比对表明，所获基因 152 bp，编码383个氨基酸。本文以pET22b为表达载体，在正向引物设计过程中，将目的基因的第四个碱基A突变成G，并与携带和不携带6*His标签的两种反向引物组合，构建了两可大量表达Ⅳ．乙酰鸟氨酸脱酰基酶的重组菌。经SDS．PAGE电泳结果表明两种重组菌皆可有效表达argE基因。结合两种重组菌的生物量、表达量和酶活实验结果，可以推断构建组合1中在重组NAOase的C末端引入的His标签对酶的活性无明显影响。考虑到后期纯经适当处理后进行10．O％SDS．PAGE电泳分析，结果表达产物Ⅳ．乙酰鸟氨酸脱酰基酶大多数以不可溶的包涵体形式表达，少量以有活性的可溶形式表达。在LB液体培养基中，有效提高Ⅳ-乙酰鸟氨酸脱酰基酶活性表达的最佳诱导条件为：采用乳糖为诱导剂，乳糖浓度15．0