高质量甘薯块根总RNA的提取研究.pdf

中国甘薯育种与产业化，2005，223—226 高质量甘薯块根总RNA的提取 陈选阳 袁照年 张招娟 (福建农林大学作物学院，福州350002) 摘要：用4种方法进行甘薯块根总RNA提取试验，筛选出一种最优的改进方法，排除了甘薯块根中淀粉、多糖、多酚类以 及纤维等次生物质的干扰，提取到了高质量的甘薯块根总RNA。所得的RNA产量较高，完整性好，纯度高，NN于进-- 步分子生物学试验，如RT—PCR，eDNA文库构建，Northern杂交等。 关键词：甘薯，块根，总RNA提取 TheIsolationofTotalRNA丽th from Rootsof HighQualityStorage Sweetpotato Chen Xuanyang，YuanZhaonian，ZhangZhaojuan Science of (Crop collegeFafu，Fuzhou350002) roots andefficient methodswere toisolatefunctionalRNAsfrom of Abstract：Four performed storage sweetpotato，onesimple methodwasscreenedtoovercomethe associatedwiththe levelof metabolitessucha8starch． problems hish complicatedsecondary and the andreasonableoftotalRNAsWasobtainedwithnodegra- polysaccharidescompounds．Usingmethod，hishquality yield and dationor wassuitablefor suchascDNA Northern contaminant，and subsequentexperiments libraryconstruction，RT—PCR Not． oftotalRNAs Keywords：Sweetpotato(／,omoeabatatas)，Storageroot，Isolation 甘薯是重要的粮食、饲料和工业原料作物，其块根含有大量的淀粉、酚类化合物、多糖、蛋白质、色素 以及纤维等次级代谢产物，严重干扰了总RNA的提取，不利于甘薯分子生物学的研究。酚类化合物在 材料匀浆时释放出来，褐化效应(browningeffect)使匀浆液变为褐色，且其氧化产物与RNA不可逆结 合，导致RNA活性丧失，且在用苯酚、氯仿抽提时RNA会丢失，或形成不溶性复合物；多糖会形成难溶 的胶状物，与RNA共沉淀下来；其他次生物质也严重影响RNA提取的质量与数量(李宏和王新力， RT—PCR及差示分析等后续试验难以进行，影响了甘薯分子生物学研究的发展。 能否有效地去除上述干扰因素是提取甘薯总RNA成败的关键。近年来，国内外开发出了许多总 PlantRNA RNA抽提试剂(盒)，有些是针对富含淀粉、多糖和黏蛋白等特殊植物材料的，如ConcertTM 1V Reagent(Invitrogen)，RNAexsystemkit(华舜)等，但结果并不理想。 本试验用了4种方法提取甘薯块根总RNA，筛选出一种简单有效的方法，提取到了高质量的RNA， 并从该RNA用RT—PCR扩增出了甘薯八氢番茄红素基因(my)的保守序列。 基金项目：福建省自然科学基金(B0110017)，福建省科技重大专项(2004NZ01) 224