RAPD技术在果树遗传育种研究中的应用进展研究.pdfVIP

园艺学文集 RAPD技术在果树遗传育种研究中的应用进展 王建湘1 钟晓红! (I 湖南省生物机电职业技术学院长沙410127 2．湖南农业大学园艺园林学院长沙410128) 【摘要】RAPD技术是一种随机扩增多态性DNA的方法，操作简单、快捷且经济．可以从分子水平提 供直接的遗传证据，、RAPD在果树育种的应用如下：(1)遗传图谱的构建；(2)种质资源的鉴定和管理； (3)体细胞杂种的鏊定；(4)基因定位与克隆；(5)分子标记辅助选择育种。 【关键词】RA})D分子标记果树遗传育种 果树研究的一个主要目标就是培育优质抗病的优良品种，对于多年生木本果树来说，由于 其高度杂合、性周期长、多倍体及次级多倍体现象普遍、植株占地面积大等特点，给育种工作带 来很大困难，传统的育种方法又多依赖于形态性状的标记，对亲本的复杂遗传背景缺乏了解， 盲目性很大。因此，想获得控制主要经济性状的基因，进而能调控这些基因的表达，成为果树 育种工作者的梦想。分子生物学技术的迅速发展，为果树遗传育种提供了多种基于DNA多 态性的分子标记，如RFI，P，RAPD，SSR，STSSCAR等，可以迅速提供与目标性状相关的分子 标记。利用这些分子标记，可对被转移的外源基因、外源染色体或染色体片段进行深入的评价 和鉴定，能够在分子水平上对种质资源进行深入的评价和鉴定，分析种质资源亲缘关系的远近 和检测种质资源的多样性，分析杂种优势；而且通过寻找与目的基因紧密连锁的分子标记，可 以直接或间接定位目的基因。育种实践中，对某性状的选择，可以在该性状表现出来之前，通 过DNA分子标记进行选择。某些情况下，由于DNA可以从种子中提取，对某一期望性状的 选择，甚至可以在种子发芽前完成，这就能大幅度缩短育种年限，加快育种进程，这样，分子标 记的应用就给果树育种注入了新的活力。 l RAPD技术 RAPD(random amplifiedp[oymorphie 研究小组同时在各自的实验室建立起来的一项DNA多态检测技术。该技术以PCR为基础， 利用一系列单一的人工合成的随机引物序列寡核苷酸链(一般为lObp)作引物，对所研究的基 因组DNA进行PCR扩增。当某一特定顺序引物在模板DNA上有两个或两个以上互补位置， 且这些位置之间的距离适当，就可以扩增出DNA片段。当模板DNA区域引物分布位点发生 碱基突变，导致互补位点减少；出现新的互补位点；互补位点之间的DNA发生插入或缺失，使 扩增产物长度发生变化；插入片段过大，导致不能扩增时，模板DNA的多态性即可被检测出 来。 RAPD技术无需预先了解物种基因组相关分子生物学信息，同样的引物可用于不同物种， 而且RAPD分析所得数据是无偏的随机样本，可以反映基因组的本质特征，因此RAPD技术 具有快速、简便、通用性好、提供的信息量丰富等优点，一问世，就受到广泛的注意，并被成功地 王建湘钟晓红ILNPD技术在果树遗传育种研究中的应用进展 用予动物、植物、人和微生物的遗传多样性检测、基因定位、品系鉴定、医学诊断、遗传图谱构 建、系统学研究等。 2 RAPD技术在果树遗传育种上的应用 2．1果树遗传图谱的构建 遗传图谱的构建多数是采用RFI，技术进行的，目前已经建立或初步建立了基因组阁谱 o在1994 的果树有苹果、桃、樱桃、扁桃、核桃、草莓、葡萄、柑橘、香蕉等十几种。Dirlewanger~3 年最先利用RAPD标记位点构建了含8个连锁群的桃遗传连锁图谱，并找到了与油桃型、垂 直型、抗蚜型等经济性状连锁RAPD标记。罗素兰等”。利用RAPD在一个葡萄的种阅杂交组 合毛葡萄830—4—96(Vids 中发展分子标记，共产生了89个稳定的RAPD标记，连同4个形态标记(花型、霜霉病抗性、果 皮颜色、果汁颜色)构建一个葡萄RAPD分子连锁图，该图覆盖基因组总长度为1033cm标记 间平均距离为17．8cm，为毛葡萄连锁图的构建提供了一个连锁框架。另外，Arus”1等用RAPD 和同工酶构建了一个含180个位点的遗传图。 2．2种质资源的鉴定和管理 由各种DNA分子标记而衍生的DNA指纹技术在种质资源的鉴定和管理上很有效。 DNA指纹图谱是能从遗传物质基础上，也就是从本质上反映生物个体差异的DNA电泳图谱， 它具有高度个体特异性和可