rhIGFⅠ调控奶牛成骨细胞OPG和RANKL mRNA的表达研究.pdfVIP

第6届家畜内科学学术研讨会论文集 81 rhlGF—I调控奶牛成骨细胞OPG和RANKLmRNA的表达 祝海宝，郭定宗·。杨世锦 (华中农业大学动物医学院，武汉430070) mRNA的表达。结果显示：1-200 殖；以0、1、10、50、lOOngmkh／GF-I干预7d后，半定量RT-PCR检测OPG、RANKL p 始下降；l一100喇mtddGF-l干预7天，OPG、RNAKL mRNA表达较0w／n[1l组均增加，lO、50、100ne／m组OPG／B 解OPG、RNAKL基因表达，加速奶牛成骨细胞骨重建。影响奶牛成骨细胞骨代谢。 关健诃：IGF-I．OPG，RANKL，成骨细胞 由于特殊生产性能的要求，奶牛在妊娠和产乳过程中需动用大量的钙磷，在—个泌乳期，产9000 千克奶的牛共向乳中分泌11．07千克的钙，8．25千克的磷，饲粮钙的利用率为38％左右．磷为45％左 右，因此每日必须为奶牛提供90-100克的钙，60-70克的才能维持泌乳需型¨。在生产中常因钙磷摄 入不足或钙磷比例不当加之奶牛体内能量的负平衡造成钙磷紊乱，为了维持正常的血钙血磷浓度，机 体通过骨骼的再吸收来克服钙磷的负平衡，从而导致奶牛软骨症、佝偻病、产后瘫痪、产褥热等一系 列骨代谢性疾病。该病发病率极高，经济损失巨大，是对奶牛业危害极大的三大疾病之一。 IGF一1是一种含有70个氨基酸残基的多肽，它几乎存在于哺乳动物所有组织中，是生长激素及其 他内分泌因子发挥作用的主要介质。其可以通过自分泌、旁分泌及内分泌而发挥类似胰岛素的代谢作 用及促有丝分裂作用，束《激RNA、DNA的合成及细胞增殖，促进糖、蛋白质和脂肪合五妒’。研究证实， IGF—I是骨骼生长和矿化中钙磷代谢调节的关键因子。体外试验表明IGF—I是成骨细胞和破骨细胞功 能的主要调节因子之一，可促进骨祖细胞、成骨细胞的增殖和分化，增强骨吸收和骨形成的偶联、加 速骨转换作用，促进骨胶原的合成田。 IGF一1在动物进化过程中具有高度的保守性，人、牛、猪的IGF—l的氨基酸序列及结构完全相同问。 ofhuman 故本试验建立体外奶牛成骨细胞模型，通过人重组胰岛素样生长因子一1(Recombination 探讨IGF一1对奶牛骨代谢的作用及机制。 1．材料和方法 1．1主要试剂和仪器 释至1、10、50、100、200 TotalRNAIsolation 1山倒，-20℃分装保存，TRIZOL RT-PCR试剂盒(Takara)。 倒置显微镜(日本NIKON2000一U型)，二氧化碳培养箱(上海力新实业有限公司GBB16型)，PCR 仪(BiometraT-IThennocychr)，凝胶影像分析仪(BioRadJeldoe2000)。 82 第6届家畜内科学学术研讨会论文集 1．2奶牛成骨细胞体外分离培养 无菌取新生奶牛肋骨，剔除结缔组织及骨膜；无菌D-Hank’8液冲洗3次，剪成l咖0大小的骨 骨片浸泡于培养液中，置37。CC0z培养箱培养，2—3d换液1次，倒置显微镜下观察细胞形态。 1．3奶牛成骨细胞的鉴定 二代细胞汇片后，行钙钴法染色。PBS冲洗贴壁细胞，纯冷丙酮固定，蒸馏水漂洗，滴加孵育液 自来水冲洗，5．09／L伊红溶液复染，自然干燥，封片，标记。 倒置显微镜下随机计数200个细胞，计算阳性细胞率。 IA MaT增殖试验 养，试验组分别用含不同浓度rhIGF-I(1、10、50、100、200ng／m1)的无血清DMEM培养，每组6孔， 3板分别为1、3、5、7d，结束前4 l，继续培养4h，吸弃孑L内培养液，加入 h每孔加入Mvr(5mg／m1)2