X射线能谱EDS分析方法及其在电镜酶细胞化学中的应用研究.pdfVIP

x射线能谱(EDS)分析方法 及其在电镜酶细胞化学中的应用 梁社坚1伦璇2吴鸿· (1华南农业大学药用植物研究中心；2华南农业大学测试中心，广东广州510642) x射线能量色散谱分析方法(energydispersive X-my 能谱分析方法，是分析电子显微镜的基本方法…。x射线能谱分柝方法具有成份分析功能和高分 辨率的特点，在电予显微学、材料科学、生物医学、地质等领域得NT广泛的应用口“1。电镜酶 细胞化学(electronmicrosenpic 细胞化学的一门崭新技术，其任务是研究细胞中各种酶在超微结构水平上的分布及其在细胞生理 和病理过程中的变化，以及这些变化与细胞功能的关系口1。X射线能谱分析方法和电镜酶细胞化 学把“超微观察和超微分析”密切结合起来，为人们在超微结构水平进行研究提供了可靠的分析 手段。 1 x射线能谱分析的原理 特征x射线的产生是入射电子使内壳层电子激发而发生的现象。对于试样产生的特征x射 o在分析电子显微镜中均采用探测效率高的EDS。从试 dispersiveX．myspectroscopy，WDS)[11 样产生的x射线通过测角台进入到探测器中，其探测器一般都是用高纯单晶体中掺杂有微量锂 的半导体固体探测器(solidstatedetector，SSD)。SSD是一种固体电离室，当x射线入射时， effecttraasistor， 室中就产生与这个X射线能量成正比例的电荷11J。而这个电荷在场效应管(field pulseheightanalyzer，MPHA)来测量它的波峰值和脉冲数。这样，就可以得到横轴为x射线能 量，纵轴为x射线光子数的谱图。根据它的能量值就可以确定元素的种类，而且通过谱的强度 分析就可以确定其含量。为了使硅中的锂稳定和降低FEr的热噪声，平时和测量时都必须用液 氮冷却EDS探测器…。最近，正在开发不需要用液氮冷却的EDS探测器【6J。 2 x射线能谱分析在电镜酶细胞化学中的应用 屯镜酶细胞化学与光学显微镜组织化学明显不同，后者是让酶与染色剂作用形成一种有颜色 的反应产物，通过观察产物的颜色效果来确定它在细胞中的分布。而前者只有当它在细胞中形成 一种不溶性的、又不易从形成的位置上被除去的、电子密度很高的反应产物后，才能在电子显微 镜下被检查出来口J，而这些反应产物通常为重金属沉淀。x射线能谱分析通过对这些沉淀物的微 区进行定性及定量分析，为判断是否为该金属沉淀提供了直接而可靠的依据。以果胶酶在广佛手 果皮中分泌囊细胞中的定位为例，介绍x射线能谱分析在电镜酶细胞化学中的应用和实验方法。 2．1材料与方法 参照AllenandNesslerI“的方法，选取新鲜材料，分割成小于lnun3的小块，迅速投入 mol／L乙 ℃固定2—4h，然质磷酸缓冲液洗涤，晟后磷酸缓冲液0C过夜。样品用0。5％果胶(O．1 基金项目：国家自然科学基金资助项目(N及广东省科技攻关资助项(No．C20605) 26 Benedict’s 酸缓冲液80一90 2)洗涤． 4C孵育10min。所有处理冷却后用一甲砷酸钠缓冲液(005mol／L，DH7 然后用1％锇酸(O 2)室温同定2h。蒸馏水冲洗f|舌，系列 05moFL。甲砷酸钠缓冲液配制，pH7 FEI-TECHNAI1 载片，醋酸铀和柠檬酸铅染色，Philip X射