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精品论文 参考文献 浅谈ELISA检测中的注意事项及常见问题 代平 （新疆五家渠市一零二团医院 831302） 【关键词】ELISA检测 注意事项 常见问题 【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）04-0296-02 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测的原理是：捌抗原或抗体包被到固相载体表面。将受检样品和酶标抗原或抗体，按一定程序与已包被的抗原或抗体反应，形成抗原抗体复合物，加入酶反应底物后，底物被酶催化成有色产物，最后通过定性或定量的分析有色产物的量，即可确定样品中被测物质的含量。ELISA法由于测定灵敏、特异，操作简便，且无放射性污染等优点，已成为目前应有最广的一种免疫测定技术。在基层医院主要用于乙肝抗原抗体及HIV抗体的检测。 现将ELISA操作中的注意事项及常见问题讨论如下： 1 注意事项 1.1仪器设备：①实验室设备应定期维护校准，酶标仪、水温箱、加样枪，应每年校准一次。②每日查看并登记冰箱的温度。③洗板机的管路用纯净水冲洗，以防堵塞和腐蚀。 1.2试剂准备：①检查试剂的注册证、包装、效期。②从冷藏环境取出的试剂盒应平衡至室温后方可使用。微孔③板打开包装后应立即将未使用的板条装入有干燥机的自封袋中密封，置2-8℃避光保存，尽快使用。④洗涤液若出现絮状沉淀应立即更换。⑤试剂使用前应摇匀。⑥不同批号的试剂不可混用。⑦所用的蒸馏水应有质量保证。 1.3标本的采集及保存①溶血标本因血清中含有过氧化物酶易造成假阳性。未②完全凝固的血液标本应含有纤维蛋白原易造成假阳性。③被微生物污染的标本可造成假阳性。④待测标本不可使用NaN3防腐可造成假阴性。⑤标本在2-8℃保存，若长期保存应置-20℃保存并避免标本反复冻融 1.4加样需①有经验操作人员进行操作。②加样枪吸样及排放速度要均匀一致，不能过快。 ③每加一份样本须更换吸头，一管血检测多个项目时，应先做ELISA测定，避免交叉污染。④加样后应充分混匀。 1.5孵育：常用的孵育温度是37℃，温育时间和温度严格按说明书操作。 1.6洗板虽不是反应过程，但却是决定实验成败很关键的一步。洗①板机洗板设置合理的工作程序，板孔加液量不宜过多或过少。②手工洗板：弃去孔内液体，将洗涤液注满各孔，静置30-40秒，甩干，重复5次排干，拍板纸不能重复使用，应注意个人防护。 1.7显色：假如显色剂后混匀，反应温度和时间一定要准确。 1.8比色：加终止液后，比色前应震荡混匀擦干孔底水汽，不能用手碰触孔底。选择正确的波长和参考波长，结果判断须在反应终止后10分钟内完成。 2 ELISA检测中常出现的问题 2.1颜色淡阳性对照吸光度值偏低，弱阳性检测不出。①试剂盒的质量问题。②试剂及样品使用前未平衡至室温。③加样量不足。④温育时间和温度不够。⑤洗涤液浸泡时间过长。⑥显色反应时间过短。⑦水质有问题。⑧洗板后未及时加下一步试剂。 2.2重复性差加①样量及试剂量不准，加样量不一致。②加样过快，个别孔液体外溅，孔间发生污染。③不同试剂中的混用。④封板纸重复使用。⑤拍板时，拍板纸反复使用。⑥温育时间、洗板、显色时间不一致。⑦多加或少加试剂。 2.3阳性对照不显色：①漏加酶结合物。②洗涤液被污染。③漏加显色剂A或B。 2.4全板显色：洗①液被污染。显色剂被酶??染变质。③洗板不充分，次数不够。④样品放置时间过长被微生物污染。 2.5花板①洗涤液稀释倍数不准。②水质有问题。③洗板不干净。④温育的时间不准，未封纸片。⑤ 样品溶血。 综上所述，ELISA法检测中要严格执行标准操作规程，做好整个分析过程中的质量控制。遇到有疑问的标本要反复核对，重新复查，才能为临床提供准确可靠的检验结果。 参考文献 [1]《临床免疫学和免疫检验》第3版 主编 王兰兰