喹乙醇的细胞毒性作用研讨.pdfVIP

其他论文 2．3ⅡA检测结果 间接免疫荧光结果显示，正常的HcT-116细胞未出现特异性荧光。呈阴性，重组表达 HCT．116肿瘤细胞中表达。(图5) 围5间接免痘荧光检测Ap叩廿n蛋白在HcT．116细胞上的表达 A正常HcT．116细胞B psFV·Apoptin转染24小时后的HcT-116细胞 3讨论 基组成，它不诱导正常细胞的凋亡，但当正常细胞被转化或具有致瘤性时，则可诱导细胞凋亡。 凋亡素诱导的肿瘤细胞凋亡不依赖p53基因，这是其在抗肿瘤治疗中一个非常有利的特点， 因为现在许多化疗药物多以p53依赖性途径诱导细胞凋亡，但在人类肿瘤细胞中．p53基因 50％已发生突变，另外，凋亡素即使在肿瘤细胞内有高水平的Bcl．2的表达亦能促使其凋亡。 此外VP3基因的核酸疫苗能激发特异性的cTL和111细胞以及体液免疫应答。 SFvRNA复制子介导的DNA疫苗是一种基于RNA复制子的、能够进行自主复制的新型 疫苗。这种疫苗在细胞质中表达，不会和基因组发生整合，具有良好的安全性。RNA复制子介 导的DNA疫苗能够自主复制，诱导细胞免疫和体液免疫，具有外源基因表达效率高。安全性 好，应用范围广等优点，具有很好的应用前景。 综上所诉，我们选用Apopt．m基因为效应基因，将SFVRNA复制子介导的含有Apo叫n 肿瘤细胞中表达并有效杀伤HCT．116肿瘤细胞，杀伤率为56．4％。由此可见，sFvRNA复 制子介导的Apopt．m能有效地杀伤HCT．116细胞。 喹乙醇的细胞毒性作用研究 尹荣焕1．橱玉荚2，王健民1．潘树德’．刘宝山‘，刘金玲‘。 (J．沈阳农业大学畜牧善压学院，辽宁沈阳JlOl6J) (2．黑龙江八一表垦失学动物科技学院，黑龙江走庆163319) 从20世纪70年代开始，欧洲经济共同体、澳大利亚、巴西、中国、日本、韩国等国家陆 续批准将喹乙醇作为一种临床药物或饲料添加剂使用。近年来。随着动物饲喂过程中中毒事 件的增多，国内外对该药提出了极为严格的限制使用要求，需要对喹乙醇的毒性及残留重新 作出系列研究与评价， 细胞毒性试验是一种在离体状态下。模拟生物体生长环境来检测生物材料或生物制品、 化学物质及其他受试物对细胞产生的溶解(细胞死亡)，抑制其生长或其他毒性作用的一系 列方法。细胞毒性的评价方法有许多，可以依据细胞的形态、生长情况来评价，也可以依据 其生化改变来评价。根据各个试验的可靠性、可重复性、灵敏度、方便性及费用大小等原则． 本试验研究选择了其中的形态学指标、中性红试验、M1Tr试验对喹乙醇的细胞毒性进行联 ll柏 中国畜牧■医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 合检测，力求获得综合、准确的评价依据。 l材料和方法 1．1药品及试剂 (1：250，Difco，美国)；标准胎牛血清(FBs，购自中国医学科学院生物工程研究所，批 ；鸡胚；二甲基亚砜；盐酸、氢氧化钠、氯仿、碳酸氢钠、谷胺酰胺等均为分 析纯。 1．2主要仪器 高速台式冷冻离心机长江湘仪离心机仪器有限公司，TGL-20M 水浴振荡器哈尔滨市东联电子技术开发有限公司，Hzs．H 坐式自动电热压力蒸汽灭菌器上海申安医疗器械厂。zDx-35BI 电热鼓风干燥箱南京实验仪器厂，HGl01．1 电热恒温培养箱南京电器三厂，HG303·3k 倒置显微镜 0啪US-BH c02培养箱He眦郴，HongkoIIg 超净工作台AIRTEC’ 酶标仪上海三科仪器有限公司，318MC型酶标仪 1．3cEF悬液的制备 取lO～11日龄鸡胚2枚，消毒．在无菌条件下，取出放入灭菌平皿中，除去头、四肢和 内脏，并剪成块，H龃k’s液冲洗二次。移入10ml青霉素瓶内，用眼科弯剪将其剪成lmm3大 小的碎块，加入Hank’s液，充分冲洗，将冲洗后组织用0．25％胰酶(pH7．6～7．8)消化，加 入lOInlDMBM，用吸管反复吹打，100目钢筛过滤后，加适量DMEM完全培养液。取上述获 得的单细胞悬液．1：10倍稀释后计数，调至lxl00个，ml装于10ml的培养瓶中备用。