喹乙醇在猪肝微粒体和血液中的还原代谢研讨.pdfVIP

喹乙醇在猪肝微粒体和血液中的还原代谢研究 刘兆颖．张振刚。姚敏，涂宏刚，陶燕飞，陈冬梅，戴梦红，王玉莲，袁宗辉‘ (华中农业大学国家兽药残留基准实验室／农业部食品安全评价重点开发实验室， 武汉43fH)70) 摘要：为了更好地了解喹乙醇的代谢特点，本文用猪肝微粒体、血液和喹乙醇孵育， HPLC检测，发现喹乙醇至少能生成三种还原代谢物：NI-还原喹乙醇，N4-还原喹乙醇和 N1，N4一还原喹乙醇，其中N】一还原喹乙醇的活性最高。时Nl-kl_．原喹乙醇的生成规律进 的还原有显著增强作用，煮沸的微粒体失去还原活性，空气和CO对其还原有抑制作用；血 红蛋白也存在还原作用．但核黄素对其无增强作用．血浆和煮沸的血红蛋白无还原作用；用 六种CYP450同工酶的选择性抑制剂对喹乙醇的代谢进一步研究：ot一萘黄酮(CYPlA)、 和4一甲基吡唑对喹乙醇的NI还原有抑制作用。结果表明：喹乙醇可能是经还原酶和细胞 粒体中的N1还原机制进行了推导，喹乙醇不能直接被NAD(P)H还原，必须分两步完成， 原酶的作用下。把氢和电子传递给核黄素，还原的核黄素再把CYP450还原．第二步是还原 的CYP450充当电子传递体在酶作用下还原喹乙醇。 关键词：喹乙醇；微粒体；血液；还原；细胞色素P450 喹乙醇(olaquindox)，义名倍育诺、喹酰胺醇，属丁畦喔啉类药物，能健进动物生K， 捉高饲料转化率，具有广谱抗菌作心，可以预防猪的人肠杆龋和痢疾。资料报道：喹乙醇具 有生殖毒性…、致，突变性‘2崃』光毒性吼但是，目前国内外对喹乙醇的代谢研究很少，1988 年，Spierenburgf”川HPLC检出了猪肖肠道中喹乙醇的二种还原代谢物，即N1．还原喹乙醇、 N4．还原睦乙醇、脱_二氧喹乙醇。JECFApo报道猪口服喹乙醇(2mg／kgb．w)后，24h内就消除 了约耸的90％，血浆最人浓度山现时间是1．2h，闪而喹乙醇吸收快，消|{5：也快。给药2大 后，检测组织中的放射性．发现肿脏干¨肾脏分别残留52和110ug／kg，肌肉为9ug／kg，70％ 以原形从尿液中排山。棘液中存在Nj．还原喳乙醇、N4．还原喹乙醇、脱二氧喹乙醇和三种 羧酸衍生物，其中3．q1基．喹喔啉-2．羧酸(MQCA)是作为水角i『后在J}f=肾组织的残留标识物。 因此为了更好地了解喹乙醇的代谢特征．本文刚体外代谢方法对其还原代谢进行了研究。这 为这一类约物的代谢研究提供了重要的思路．为喹乙醇的毒性研究和残留监控提供重要的指 导意义。 1材料与方法+ 1．1试剂 。 喹乙醇(olaquindox)对照品购自中国兽药监察所：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 (nicotinamide adeninedinucleotide phosphateNADP)．6-磷酸葡萄糖(glucose6-phosphate)，6-磷酸 葡萄糖脱氢酶(glucose6-phosphate SUL)， (quindine)，8一甲氧补骨脂素(8-methoxypsoralen ANF)，4-甲基吡I唑(4-methylpyrazole acid Box1 BCA)试剂包购自Pierce公司(P．017，Rockford，IL)：还原型的划酰胺腺嘌呤二核苷酸 (desoxy01aquindox)对_}{《{品由本实验室合成；其它的试剂均为分析纯。 t．2微粒体制备 取冷冻保存的肝组织．_【IJ预冷(4C)的0．15M KCI溶液冲洗三次，除去肝组织中的血液 成分，加1倍体积的0．05M Tris—HCI(pH7．4)缓冲液(含imMEDTA)，剪碎，_【}j玻璃匀浆器 匀浆，以上操作均在冰浴中进行。将匀浆液转移到预冷的离心管中，10，0009(4℃)离心 20rain．上清液再100，0009离心60min．淡红色沉淀用0．05MTris—HCI(pH7．4)缓冲液重 悬，分装丁|小试管中．一80C贮存。BCA法”l测山其浓度为lOmg／ml。 1．3血液的制备 颈静脉放血后，用加肝素的塑料离心管收集，10009离心5min(4C)，上清液即为血浆， 沉淀用0．ISMK