现代微生物技术在海水养殖生态学研究中的应用研究.pdf

援建覆n。 第三届海洋生物高技术论坛 2005．88．19．23 现代微生物技术在海水养殖生态学研究中的应用 李可‘，郑天凌他， 杨晓茹1，陈跃庆‘ (1．厦门大学生命科学院应用与环境微生物研究所， 2．近海海洋环境科学国家重点实验室，．厦门，361005) 摘要：海洋环境中的微生物，其个体微小、但种类繁多、数量庞大，生物多样性显著，在海水 养殖生态系统中的物质循环，能量流动，信息传递等方面扮演着极其重要的作用。本文介绍 了若干海水养殖微生物生态研究中的最新方法，着重阐析了分子微生物及分子生态学方法在 研究当前养殖生态系统退化、水质恶化、病害控制等问题中的准确性、重要性、可行性，报 道了采用微生物新技术进行海洋环境微生物研究的新成果；并指出整合微生物学、分子生物 学、海洋科学、养殖生态学等多学科，针对国际上在海水养殖科学研究中的热点和难点，联 合攻关的必要性与紧迫性。 引言：水产养殖生态系统是～个极为复杂的生态系统。在这个系统中，除了具有复杂的物质构成、 物质存在形态和迁移变化外，还存在着复杂的生命活动。水产养殖生物作为存在于水体中的生命 有机体，其存在和延续均肖接或间接地依赖于水体中的物质循环和能最流动，同时又在不断地改 变着周围水体中物质的状态。冈此整个水产养殖过程就是在养殖生物和养殖生态环境的不断依存 和矛盾中完成的。微生物是自然界中分布最广、种类最多、数量最大、个体最小的生物类群。由 于微生物能直接或间接作用于水产养殖对象，从而影响养殖效果，所以微生物在水产养殖中的虑用 已越来越为人们所重视。本文就目前国内外在海水养殖生态学研究中有重要应用价值的现代微生 物技术作了介绍，并报道了作者采用上述方法进行现场测定的试验结果。 海水养殖水体细菌数量、生物量、生长速率的测定 大量的研究表明，细菌的的数景、生物量及其代谢活性在水域生态系中占据着主要作用。 一方面，水生细菌起着降解许多养殖动物无法利用[i9有机质的作用；另一方面，它们能有效 地把低浓度的溶解有机质(DOM)转化成高蛋白，富营养的颗粒性有机质一一细菌菌体蛋白， 有：接或间接地提供给鱼池中的养殖动物，刚砸显示了其在食物链中的重要作用。因此养殖水 体中细菌生物量、生长速率的研究对正确评估绌菌在鱼池生态系的物质循环和能量流动中的 作用及其同碳供饵能力尤为重要。 1)细菌生物量的测定 中文名称是4，6．联脒一2一苯基吲哚，是一种常用的荧光染料，其作用机理与溴化乙锭等染色剂 的机理类似：它们与DNA双螺旋的凹槽部分可以发生相互作用，从而与DNA的双链紧密结合。 结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好UV(紫外光)的激发波长 正好是356nm，使得DAH成为了一种常用的荧光检测信号。具体做法是将经DAPI染色后的样 36 疆毽蠹仃 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19—23 品经抽滤，细胞被截留在滤膜上，随后用此滤膜进行荧光显微计数。随机选取10个视野计数 被染色的细菌个体(每个视野以15—30个细菌为宜)。按下式计算水样的细菌丰度： 细菌丰度(cell／m1)=AxS1／(S2xV) 其中，A为10个视野中的细菌平均数：S1为滤膜的有效过滤面积；S2为视野面积；V为过滤 水样体积。 细菌生物量(txgC／m1)=细菌丰度x20x10一； 20为茵体的碳含量(fg／cell) (2)利用可提取性磷脂表征沉积物中微生物的生物量：在国外环境生态研究中，磷脂常 被作为海洋和河H沉种物中微生物生物量的生物标志物，在国内则很少有见报道。磷脂存在 于所有细胞的细胞膜中，在适：卣的条件下自然微生物群落中细菌细胞磷脂含量与生物量有着 相对稳定的比例关系。由]二磷脂是细菌细胞中的主要成份，帮可根据这点来确定细菌的生物 量及其群体的结构组成。对于某些特殊的微生物来说，则可根据其细胞体内含有的特定脂 类成份来估算环境中这些生物体的生物量。 2)细菌生长速率测定 氚示踪胸腺嘧啶脱氧核苷的TTI法：它是建立在测定细菌DNA合成率的基础上，经过一系 列前提，可以把DNA合成率转化为其生长速率。这种方法迅速、合理、灵敏度高，但需要应 用放射性示踪(氚)